Мы поможем в написании ваших работ!
ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
|
Эксперимент 3 Хан и др.(Hahn et al)
Хан, Галло и их коллеги заменили продукцию cДНК путём обратной транскрипции поли(а) РНК клонированием молекулярной [ДНК]. «Свежие неинфицированные Н9-клетки (8 X 109) были инфицированы концентрированным супернатантом от клеточной линии H9/HTLV-III содержащей 4x1011 частиц HTLV-III...Внехромосомные [цитоплазматические] ДНК были выделены...и проанализированы на содержание в ней в виде неинтегрированной вирусной ДНК с использованием сДНК HTLV-III в качестве зонда»15.
(Этот зонд сДНК ВИЧ был получен в эксперименте 1. Неинтегрированный относится к ДНК, не вставленной в ядерную ДНК). «Полоса из ~ 10 тысяч нуклеотидов (kb)» была обнаружена в гибридизации, из чего авторы пришли к выводу, эта «ДНК представляет собой линейную форму неинтегрированного HTLV-III [ВИЧ]. Когда они переварили неинтегрированную ДНК рестрикционными ферментами, она генерировала «три преобладающие полосы 9, 5.5 и 3.5 kb». Они «клонировали эту ДНК в библиотеку λ фага для скрининга с вирусной сДНК». Они получили три клона, λBH-10, λBH-5 и λBH-8, которые они интерпретировали как «λ BH5 плюс λ BH8, составляют один геном HTLV-III и λBH-10 другой ... Однако вирусные фрагменты, клонированные в λ BH5 и λ BH8 могут быть получены из одного или двух разных вирусов» и являются« двумя вариантными формами HTLV-III в клеточной линии H9/HTLV-III». Они также заявили: «Используя эти клоны как зонды, мы также обнаружили HTLV-III -вирусные последовательности в инфицированных клеточных линиях, отличных от H9/HTLV-III, которые были установлены у разных больных СПИДом, а также в свежих некультивированных лимфоидных тканях больных СПИДом19». (Ссылка 19 - это третий документ о геноме ВИЧ, опубликованный Шоу (Shaw) и его коллегами16, см. ниже).
|
