Поставить опыт с целью установить специфичность и термолабильность

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 8 из 15Следующая ⇒

8. Поставить опыт с целью установить специфичность и термолабильность

 слюны,влияния активаторов и ингибиторов на активность амилазы слюны.

Работа № 27. Определение термолабильности ферментов на примере

амилазы слюны.

Скорость ферментативных реакций, как и неферментативных,

увеличивается при повышении температуры. Но в связи с белковой природой

ферментов повышение температуры может привести к их денатурации и

снижению скорости реакции. Большинство ферментов термолабильны — при

нагревании до 60-80 °С утрачивают каталитическую активность.

Оборудование: штатив с пробирками, пипетки глазные, термостат на 38 оС, спиртовки, держатели для пробирок.

Реактивы:

1. Крахмал, 0,1 % раствор.

2. Фелинга реактив*.

3. Люголя реактив.

Исследуемый материал.Раствор слюны.

Ход работы. Готовят три инкубационные пробы. Во все три пробирки

налить по 10 капель 0,1 % раствора крахмала. В первую пробирку добавить 10

капель разведенной слюны, во вторую — 10 капель прокипяченной слюны, в

третью — 10 капель воды (контрольная проба). Пробы выдержать в термостате

в течение 15 мин при 38 °С. Затем содержимое каждой пробы разделить на две

части и проделать по 2 реакции: Фелинга и реакцию с йодом (см. работу № 26).

Работа № 28. Определение влияния реакции среды на активность

ферментов и определение оптимума рН для α-амилазы слюны.

Для разных ферментов существует свой оптимум рН в кислой, щелочной

или нейтральной среде, при которой фермент наиболее активен. Отклонение рН

от оптимума влияет на степень ионизации фермента и субстрата, может

нарушить связь между белковой частью фермента и их простетическими

группами, может влиять на связывание субстрата с ферментами. Например, для

пепсина оптимум рН составляет 1,5-2,5; липазы желудочного сока — 5,5-7,5;

трипсина — 8,0-9,0; каталазы — 6,0-8,0 и т.д. Для амилазы слюны оптимум рН

6,8-7,2. В кислой и щелочной среде активность амилазы снижается.

Оборудование: штатив с пробирками, пипетки глазные, пипетки объёмом

1 или 2 мл, термостат на 38 оС, спиртовки, держатели для пробирок. Реактивы:

1. Крахмал, 0,5 % раствор.   2. Двузамещенный фосфорнокислый натрий (Na2HPO4), 0,2 м раствор*.

3. Лимонная кислота, 0,1 м раствор*. 4. Люголя реактив.

Исследуемый материал:раствор слюны.

Ход работы.В 7 предварительно пронумерованных пробирок налить 0,2 м раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 м раствор лимонной кислоты в

соотношениях, указанных в таблице. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0.

В каждую пробирку добавить по 10 капель 0,5 % раствора крахмала, по 10 капель

разведенной слюны. Перемешать содержимое пробирок  и выдержать в термостате в

течение 15 мин при 38 °С. Затем во все пробирки добавить по 1 капле раствора йода в

йодистом калии (р-р Люголя) и перемешать. Оценить окраску и определить рН, при

 котором амилаза действует наиболее активно. В зависимости от активности слюны

ее можно разводить в 100, 50 или 10 раз

Познавательные статьи:



Формы дистанционного обучения

Передача мяча двумя руками снизу

Значение правильной осанки для жизнедеятельности человека

Основные ошибки при выполнении передач мяча на месте