Принцип работы водяной бани. Принцип работы песчаной бани. Провести кислотный гидролиз белка. (взяла из инета,методе нет)

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 15Следующая ⇒

Принцип работы водяной бани

Принцип работы заключается в нагревании (охлаждении) веществ в колбах, при обмывании их водой, нагретой до определенной температуры. Чаще всего нагревательный элемент спиральный, выполнен из специального жароустойчивого сплава. Рабочая ванная изготовлена из нержавеющей стали, и имеет крышку с несколькими отверстиями для установки емкостей с растворами. Сбоку ванной имеется сливной кран, через который выливается жидкость-теплоноситель (вода).

Принцип работы песчаной бани

Песчаная лабораторная баня применяется тогда, когда требуется широкий диапазон температур нагрева. Песчаная баня представляет собой большой лоток из нержавеющей стали с кварцевым песком, обладающим высокой тепловой инерцией, и несколькими термоэлементами. Сосуды помещаются в верхний, равномерно прогретый слой песка.

3. Провести кислотный гидролиз белка.(взяла из инета,методе нет)

ПРИНЦИП МЕТОДА: В лабораторных условиях гидролиз белков используется для определения первичной структуры, аминокислотного состава белков. Большинство биополимеров в реакциях с водой распадаются на мономеры. Гидролиз катализируют протоны, ионы гидроксила и ферменты по механизму нуклеофильного замещения у углерода с карбонильной группой. Полный кислотный гидролиз белков при кипячении происходит в течение 12–96 часов.

ХОД РАБОТЫ:

1 В химическую колбу внести 20 мл раствора яичного белка.

2 Добавить 5 мл концентрированной НCl.

3 Отлить 0,5–1 мл смеси в пробирку (№ 1)

4 Колбу закрыть резиновой пробкой с длинной стеклянной трубкой (обратный холодильник).

5.Содержимое колбы кипятить под вытяжкой в течение 45 мин.

6 Налить 0,5–1 мл гидролизата в пробирку (№ 2)

7 Нейтрализовать содержимое пробирок 20% NaOH по лакмусу до голубой окраски.

8.Провести биуретовую реакцию в пробирках № 1 (раствор белка до гидролиза) и № 2 (раствор белка после гидролиза).

4. Провести очистку белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте.

Принцип метода: диализ демонстрирует макромолекулярную природу белков. Диализ основан на способности малых по геометрическим размерам молекул (кристаллоидов) диффузно проникать через полупроницаемые мембраны, а макромолекул (коллоидов) – не проникать. Белки являются высокомолекулярными веществами и не диффундируют через полупроницаемые мембраны (например, коллодиевую или целлофановую пленки). Это свойство белков лежит в основе очистки белков от низкомолекулярных органических и неорганических примесей. Основанный на этом же принципе метод гемодиализа, применяют для лечения больных с почечной недостаточностью (аппарат «искусственная почка»). С этой целью применяют диализатор или электродиализатор. Простейшим диализатором является сделанный из коллодия или целлофановой пленки мешочек, наполненный раствором белка и погруженный в стакан с дистиллированной водой.

Ход работы: в подготовленный целлофановый (коллодиевый) мешочек добавить 1 мл сыворотки крови (раствор яичного белка) и 3-4 мл 6 % раствора хлористого натрия, аккуратно поместить их в стеклянный стакан с дистиллированной водой. Через 30-60 минут с небольшими порциями диализируемого раствора белка (содержимое мешочка) и диализата (наружная жидкость) провести пробы на хлориды и белок, чтоб удостовериться в том, что соль диффундировала, а белок остался в мешочке.

Биуретовая реакция Определяют, содержит ли исследуемый раствор белок. Для этого к 5 каплям раствора добавить 10 капель 10 % раствора NaOH, одну каплю 1 % раствора CuSO₄ и полученную смесь тщательно перемешать. Появление красно-фиолетовой окраски свидетельствует о наличии в растворе белка.

Обнаружение хлоридов: к 0,5-1 мл раствора добавить 1-2 капли 1% раствора азотной кислоты и 1-2 капли 1% раствора азотнокислого серебра. Отметить выпадение творожистого осадка при наличии хлоридов.

Принцип метода. Основным свойством декстранового геля, как хроматографического материала, является способность разделять вещества согласно размерам молекул. Крупные молекулы при хроматографии не проникают в частицы геля и элюируются в свободном объеме, т.е. в свободном пространстве между частицами геля. Применяя сефадексы (молселекты) разных типов с разными размерами частиц и изменяя условия хроматографии гель- фильтрацию на сефадексах (молселектах) можно использовать для разделения смесей в зависимости от молекулярной массы, для определения чистоты веществ, а также в целях обессоливания и концентрирования растворов высокомолекулярных соединений и др.

Ход работы. Для проведения работы открыть подготовленную колонку, дать профильтроваться воде над слоем геля и наслоить пипеткой 1-1,5 мл 2 % раствора гемоглобина или другого окрашенного белка с равным объемом 3 % раствора хлористого натрия. Как только раствор профильтруется (войдет в гель), ополоснуть стенки колонки небольшим количеством дистиллированной воды и начать элюирование дистиллированной водой со скоростью тока примерно 0,5 мл в минуту. Элюаты объемом 2,5-3 мл собирать в отдельные пробирки. Через 12-15 минут элюирование прекратить, в исходном растворе белка и в отдельных фракциях элюата проверить наличие белка по окраске содержимого пробирок и наличие хлоридов реакцией с азотнокислым серебром.

5. Определить концентрацию белка сыворотки крови биуретовым методом.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Познавательные статьи:



Алгоритмические операторы Matlab

Конструирование и порядок расчёта дорожной одежды

Исследования учёных: почему помогают молитвы?

Почему терпят неудачу многие предприниматели?