Рисунок 1 -  Микроклональное размножение роз

↑

⇐ ПредыдущаяСтр 8 из 12Следующая ⇒

Рисунок 1 -  Микроклональное размножение роз

 II этап – собственно размножение. В некоторых случаях состав  питательной среды на втором этапе (собственно размножение) остается прежним. В остальных случаях ее обогащают гормонами, способными индуцировать морфогенетические реакции in vitro.

III-IV этапы - укоренение микропобегов, их последующая адаптация к почвенным условиям и высадка в поле. Это наиболее трудоемкие этапы, от которых зависит успех клонального микроразмножения. На этапе укоренения и высадки в грунт обычно изменяют основной состав среды. Уменьшают количество солей и углеводов, исключают цитокинины и добавляют ауксины. Выбор концентрации ауксинов, необходимых для нормального укоренения
побегов зависит от ряда причин [5 c.22-28].

3.2 Питательные среды для культивирования растительных клеток и тканей in vitro

Питательная среда - основной фактор успешного культивирования изолированных органов, тканей и клеток растений. Основными компонентами питательных сред являются минеральные соли (макрои микроэлементы), источник углеводного питания (сахароза), витамины и регуляторы роста (фитогормоны). Иногда в состав питательных сред входят органические добавки (гидролизат казеина, кокосовое молоко, дрожжевой экстракт, эндосперм кукурузы). Среды по консистенции бывают твердыми или агаризованными, и жидкими, в зависимости от цели исследования. Для приготовления твердых питательных сред используется агар-агар. Питательные среды содержат железо в хелатированной форме, которая обеспечивает его доступность растению. Большинство тканей, культивируемых in vitro, способны синтезировать все необходимые для жизнедеятельности витамины. Но на первом этапе - при введении в культуру, обязательно добавлять витамины. Для регуляции дифференциации и морфогенеза неоходимы регуляторы роста. Подбирая соотношение и концентрацию этих веществ, можно направленно регулировать их органогенное действие.

Культуры растительных тканей не автотрофны в отношении углеводного питания и их необходимо выращивать на питательных средах, которые содержат сахара. Самым оптимальным источником углеводного питания для большинства тканей является сахароза в концентрации 2-5%.

Значение рН среды влияет на стойкость и усвояемость ряда составляющих. Значение рН большинства растительных тканей лежит в пределах от 5,0 до 7,0. Величину рН среды перед автоклавированием доводят до 6,5-7,0, потому что в дальнейшем она немного уменьшается в результате образования сахарных кислот во время автоклавирования.

Для удобства и ускорения процесса приготовления питательной среды целесообразно заранее приготовить концентриванные (маточные) растворы макро- и микросолей, витаминов и регуляторов роста.

Для приготовления маточных растворов каждую соль взвешивают и растворяют отдельно в новой порции дистиллированной воды. Растворы хранят в холодильнике при 2-4 ºС в посуде из темного стекла не дольше 4-6 недель. Растворы витаминов и фитогормонов готовят в концентрации 1 мг/мл. Растворяют в дистиллированной воде и хранят в замороженном состоянии в морозильной камере. Углеводы и органические добавки взвешивают и добавляют непосредственно в среду. 15 После добавления в среду всех компонентов добавляют воду до нужного объема и доводят рН раствора до определённого значения.

Существует огоромное разнообразие питательных сред для культивирования растительных клеток, тканей и органов в условиях in vitro. Наиболее известные, универсальные и часто используемые: среда Мурасиге и Скуга (МС) и ее модификации, среда Гамборга - среда В 5, среда Блейдза, среда Уайта, среда Шенка-Хильденбранта (ШХ) и др.

Для введения нового растительного объекта в культуру in vitro или для проявления различных путей морфогенеза in vitro необходимо эмпирически подбирать состав питательной среды.

Познавательные статьи:



Психологические особенности спортивного соревнования

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Занятость населения и рынок труда

Социальный статус семьи и её типология