Работа № 1. Качественные реакции на инсулин.
Похожие статьи вашей тематики
Инсулин является типичным гормоном белковой природы, содержащий сульфгидрильные группы цистеина, и дает цветную биуретовую реакцию на белок и реакцию Фоля на содержание SH-групп. Для реакций используют готовый препарат инсулина в ампулах.
а) Биуретовая реакция на пептидную связь.
Ход работы: В пробирку добавить 5 капель раствора инсулина, 10 капель раствора 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора сульфата меди. Отметить появление сине-фиолетового окрашивания.
б) Реакция Фоля на серу содержащие аминокислоты.
Ход работы: В пробирку налить 5 капель раствора инсулина, добавить 5 капель 30% раствора едкого натра и 1 каплю 5% раствора уксуснокислого свинца. Отметить появление черного осадка.
Работа № 2. Качественные реакции на адреналин.
а) Реакция с хлорным железом.
Ядро пирокатехина адреналина образует с ионами железа соединения типа фенолята.
Ход работы: В пробирку поместить 3 капли 0,1% раствора адреналина, прибавить 1 каплю 1% раствора хлорного железа (FеСl3). Отметить появление изумрудно-зеленого окрашивания. При добавлении 1 капли концентрированного раствора аммиака окраска переходит в красную, а затем в коричневую.
б) Диазореакция.
При добавлении к раствору адреналина диазореактива образуется сложное соединение типа азокрасителя красного цвета.
Ход работы: Поместить в пробирку 3 капли 1% раствора сульфаниловой кислоты, 3 капли 5% раствора азотистокислого натрия (Nа NО2), 5 капель 0,1% раствора адреналина и 3 капли 10% раствора углекислого натрия. Отметить появление красной окраски.
Работа № 3. Качественная реакция на тироксин.
При разрушении тироксина щелочью образуется йодистый калий, из которого йодноватистый калий легко вытесняет свободный йод. Выделившийся йод дает с крахмалом характерное синее окрашивание.
Ход работы: Для щелочного гидролиза тиреоидина 5 таблеток тиреоидина тщательно растереть в фарфоровой ступке. Порошок переместить в колбочку для гидролиза, добавить 5 мл. 10% раствора едкого калия (КОН) и 5 мл. дистиллированной воды. Содержимое колбы кипятить 12-15 минут.
Для открытия йода к 1мл. гидролизата добавить по каплям 10% раствора серной кислоты (Н2SО4) до кислой реакции по лакмусу, затем прибавить 3-4 капли 1% раствора крахмала и 5-10 капель 2% раствора йодноватистого калия (КIО3). Отметить появление синего окрашивания.
Работа № 4. Количественное определение адреналина (по Фолину).
Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности синего окрашивания, которое образуется при взаимодействии адреналина с реактивом Фолина.
Реактив Фолина состоит из солей фосфорновольфрамовой и фосфорномолибденовой кислот, которые при взаимодействии с адреналином восстанавливаются с образованием более низких окислов металлов, комплексы которых окрашиваются в синий цвет.
Ход работы: В 2 центрифужные пробирки (опыт и контроль) внести по 1мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В опытную пробирку прилить 0,1мл сыворотки (плазмы) крови или 0,5мл слюны, в контрольную – такой же объем дистиллированной воды. Пробирки встряхнуть и центрифугировать при 2000 об./мин. В течение 5-6 минут. Надосадочную жидкость осторожно слить в чистые пробирки, добавить по 4мл. 10% раствора углекистого натрия (Nа2СО3) и 0,5мл. рабочего раствора Фолина. Разви-вается синяя окраска, интенсивность которого измерить в кювете на 10мм при красном светофильтре опыт против контроля.
Количество адреналина в пробе определить по калибровочному графику с содержанием в 10,15 и 20 мкг адреналина в 0,1мл воды и выражают на литр биологической жидкости.
У здорового человека в сыворотке (плазме) крови содержится 100-230 мкг/л, в слюне – 0-30 мкг/л адреналина. При эмоциональном или физическом напряжении, при феохромоцитоме (опухоль мозгового слоя надпочечников) содержание гормона многократно возрастает.
Эталоны ответов на тесты
Вид 1. Тест 1: А, Б, В, Е. Тест 2: Г.
Вид 2. Тест 1: 1-А, Г; 3-А, В, Г, Д; 4-Б; 5-Б.
Тест 2: 1-А; 2-В; 3-А; 4-А; 5-А.
Вид 3. Тест 1: 1→3→5→4→2→7→6.
Тест 2: 3→1→2→5→4→6.
Вид 4. Тест 1: В (+, +, -). Тест 2: Е (-, -, -).
|
