Занятие № 3. Методы выделения и очистки белков.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 44Следующая ⇒

Цель занятия. Освоить некоторые методы выделения и очистки белков, используемые в препаративной биохимии и лабораторной медицине. В результате освоения темы студент должен ознакомиться с методом электрофоретического разделения белков и научиться анализировать протеинограмму.

Содержание занятия: студентам предстоит ответить на вопросы тест-контроля и вопросы преподавателя; ознакомиться с методами электрофореза белка на бумаге, очистки раствора белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте, проанализировать полученные данные и сделать выводы.

УИРС - решение ситуационных задач, обсуждение рефератов.

Методические указания к самоподготовке

Методы препаративной химии белков основаны на их физико-химических свойствах, поэтому при подготовке к занятию следует повторить физико-химические свойства белков. Особое внимание следует уделить коллоидным свойствам белков, таким понятиям как амфотерность аминокислот и белков, зависимость электрических свойств белков от аминокислотного состава и свойствам белков в изоэлектрическом состоянии. Для лучшего усвоения материала занятия, используя учебник, лекции и дополнительную литературу, выполните следующие задания.

Подготовьте к предстоящему занятию протокол, в котором отразите принцип метода и ход работы. Не забудьте оставить достаточно места для выводов после выполнения каждой работы.

Графологическая структура «Выделение и очистка белков»

Примеры тестов контроля исходного уровня знаний

Вид 1. Выберите наиболее правильный ответ.

1.1. Молекулярная масса большинства белков находится в пределах ….

а) от 6000 до 10000000 и выше

в) свыше 50000

б) от 30000 и выше

г) свыше100000

1.2. Глутаминовая кислота при рН 10 находится в виде иона ….

в)

б) г)

1.3. Смесь аминокислот, содержащая аспартат (pI 3,0) и лизин (рI 9,7), разделяется методом ионообменной хроматографии. В каком порядке будут выходить аминокислоты из колонки, заполненной триметиламинополистерольной смолой, имеющей положительно заряженные группы (анионообменник) при рН 7?

а) асп, лиз

б) лиз, асп

1.4. Детергенты (тритон Х-100, додецилсульфат натрия) при экстракции белков к среде извлечения добавляют для ….

а) повышения устойчивости белков к денатурации

б) перевода белков в изоэлектрическое состояние

в) разрушения белково-липидных комплексов

1.5.Оптическое явление, доказывающее коллоидные свойства белков,- это ….

а) явление светорассеивания – конус Тиндаля

б) вращение плоскости поляризованного света

в) интенсивное светопоглощение при длине волны 280 нм

Вид 2. Установите соответствие.

2.1. Классифицируйте приведенные ионообменные смолы в зависимости от заряда функциональных групп.

1. триметиламинополистирол а. катионообменник

2. диэтиламиноэтилцеллюлоза б. анионообменник

3. карбоксиметилцеллюлоза

4. сульфонированные полистиролы

2.2. В каком направлении будут двигаться в электрическом поле следующие белки при рН 6,3?

1. овальбумин (ИЭТ 4,6) а) останется на старте

2. β-лактоглобулин (ИЭТ 6,3) б) движется к катоду

3. химотрипсин (ИЭТ 9,5) в) движется к аноду

Вид 3. Правильное сочетание ответов.

3.1. Смесь аминокислот, содержащая:

1) глицин

2) аланин

3) лизин

4) глутаминовую кислоту

5) аргинин

подвергли электрофорезу на бумаге при pH=6.

Какие аминокислоты будут двигаться при этом условии к «аноду»?

3.2. Метод разделения белков, основанный на различии размера белковых молекул -

1. кристаллизация

2. диализ

3. ионообменная хроматография

4. гель-фильтрация

5. изоэлектрическое фокусирование

3.3. Электрофоретическая процедура, не зависящая от заряда белка -

1. диск-электрофорез

2. зональный электрофорез

3. изоэлектрическое фокусирование

4. электрофорез в полиакриламидном геле с добавлением детергента (натрия додецилсультата)

5. электрофорез на бумаге

Вид 4. Определите правильность утверждений и связь между ними.

4.1. Очистить раствор белка от низкомолекулярных примесей можно методом гель-фильтрации на сефадексе, потому что с помощью этого метода можно разделить вещества с разной молекулярной массой.

4.2. По степени дисперсности растворы белков являются истинными растворами, а по свойствам – коллоидными, так как белки являются высокомолекулярными соединениями.

Примеры ситуационных задач

Задача 1. При электрофорезе на бумаге белков сыворотки крови больного Р.С. получили следующие результаты: альбумины-48,5%, α₁-глобулины-12,6%, α₂-глобулины-7,3%, β-глобулины-14,8%, γ-глобулины-16,8%. Выделите изменения, обнаруженные в белковом спектре крови больного и рассчитайте величину белкового коэффициента, если общее содержание белка в крови у данного больного составляло 62 г/л.

Задача 2. Необходимо разделить смесь белков, содержащую церрулоплазмин (Mr 151000, ИЭТ 4,4), β-лактоглобуллин (молекулярная масса 150000, ИЭТ 6,3) и γ-глобулин (молекулярная масса 37100, ИЭТ 5,2). Предложите методы разделения смеси этих белков. В какой последовательности будут выделяться эти белки из смеси?

Самостоятельная работа студентов

Познавательные статьи:



Психологические особенности спортивного соревнования

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Занятость населения и рынок труда

Социальный статус семьи и её типология