Лабораторная диагностика гепатита А.
Вирусологический метод: Материал: фекалии. Готовят экстракт из фекалий, заражают животных (шимпанзе, мармозеток), культуры клеток лимфоцитов. ЦПД не оказывает, выявляют с помощью РИФ - готовят препарат, окрашивают специфической меченной антисывороткой, наблюдают зеленое свечение. Идентификация: ИФА и РИА.
ИФА: Компоненты: специфические АТ, вируссод. материал, АТ той же специфичности, конъюгат, хромогенный субстрат. Связывают специфические АТ с пластиком лунки планшета, вносят вируссод. материал, вносят АТ той же специфичности, конъюгат и субстрат. Пол. результат: изменение окраски субстрата.
РИА: Компоненты: фекальный экстракт, диагностическая сыворотка, меченные изотопом АТ. Адсорбируют АТ из сыворотки на поливиниловой поверхности пробирок, добавляют фекальный экстракт, определяют адсорбировавшийся АГ с помощью меченных радиоактивным йодом АТ.
Серологический метод: выявляют IgM и IgG. Используют РСК, РИА, ИФА.
РСК: Компоненты: 1 система – сыворотка больного, диагностикум, комплемент, ИХН; 2 система – гемолитическая сыворотка и взвесь эритроцитов барана. Готовят 1 систему, инкубируют 37С 1 ч. Добавляют вторую, инкубируют 37С 1 ч. Положительный результат – отсутствие гемолиза.
ИФА: Компоненты: сыворотка больного, диагностикум, конъюгат, хромогенный субстрат. Связывают диагностикум с пластиком лунки планшета, вносят разведенную сыворотку, конъюгат и субстрат. Пол. результат: изменение окраски субстрата.
РИА: на лунках планшета сорбируют диагностикум, добавляют разведенную сыворотку больного. При наличии соответствующих АТ формирует комплекс АГ-АТ. Вносят меченную изотопом антивидовую сыворотку. Меченный АТ адсорбируются на комплексе АГ-АТ. Чем больше АТ в сыворотке больного, тем больше будет связана радиоактивная метка. Определение радиоактивности в жидкой фазе содержимого лунок позволяет судить о количестве АТ в сыворотке больного.
|
