Определение окислительно-восстановительных ферментов бактерий

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 19 из 20Следующая ⇒

Изучение сахаролитических и протеолитических ферментов часто оказывается достаточным для определения вида, но в некоторых случаях возникает необходимость включать в изучение другие ферменты: уреазу, каталазу, цитохромоксидазу, нитратредуктазу и др.

Тест на уреазу. Наличие уреазы определяют на среде с мочевиной и индикатором фенолротом (начальный цвет среды-желтый). При расщеплении мочевины на аммиак и углекислый газ накапливается аммоний, что сдвигает рН в щелочную сторону и изменяет цвет индикатора на красный.

Тест на нитратредуктазную активность. Этот тест используют для идентификации отдельных видов бактерий. Он позволяет определить способность восстанавливать нитраты в нитриты. Выявление нитратредуктазы (фермента восстанавливающий нитраты в нитриты) характерно в основном для факультативных анаэробов. Способность к восстановлению NO3 в N02, определяют культивированием в МПБ, содержащем 1% раствор KNO3. Для определения нитритов в среду добавляют несколько капель реактива Грисса, содержащий уксусную кислоту. Появление красного окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.

Тест на каталазу. Каталаза — это фермент, катализирующий реакцию разложения перекиси водорода с образованием воды и кислорода. Каталазу содержат аэробы и факультативные анаэробы, но она отсутствует у облигатных анаэробов, на которых перекись водорода оказывает губительное действие. Бактериологическую петлю исследуемой культуры с плотной питательной среды суспезируют в капле 3% раствора перекиси водорода на предметном стекле. Образование пузырьков газа свидетельствует о проявлении каталазной активности.

Тест на оксидазу (цитохромоксидазу). Цитохромоксидаза — это фермент, обеспечивающий перенос электронов на кислород в процессе аэробного дыхания. Активность цитохромоксидазы учитывают при дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae и др. Обнаружение цитохромоксидазы у аэробов проводится путем нанесения и растирания петли культуры на индикаторную бумажку, пропитанную спиртовым раствором альфа-нафтола и 1% водным раствором ментола. О наличии цитохромоксидазы судят по синему окрашиванию, появляющемуся через 2—5 мин.

Тест на плазмокоагулазную активность. Плазмокоагулаза - фермент, свертывающий плазму крови животных. Петлю агаровой культуры стафилококка суспензируют в 0,5 мл цитратной кроличьей плазме, разведенной 1:5. Результаты регистрируют через 1, 2, 4 и 18 часов инкубации проб в термостате при температуре 37°С. Появление на дне пробирки студнеобразного сгустка свидетельствует о наличии плазмокоагулазы.

Тест на гемолитическую активность. Определяется при посеве испытуемых микроорганизмов на кровяной агар. Гемолитическая активность характеризуется появлением зоны просветления среды вокруг колоний. Различают β-гемолиз (полный гемолиз), когда образуются зоны просветления вокруг колоний, α-гемолиз или неполный гемолиз, при наличии зон зеленого цвета вокруг колоний. Отсутствие гемолиза обозначается как γ-гемолиз.

При идентификации многих микроорганизмов используют реакцию Фогеса — Проскауэра на ацетоин — промежуточное соединение при образовании бутандиола из пировиноградной кислоты. Положительная реакция свидетельствует о наличии бутандиолового брожения. Определение образования ацетоина проводится при добавлении к культуре 40% КОН и 5% альфа-нафтола. При наличии ацетоина жидкость приобретает красное окрашивание, т.е. в щелочных условиях ацетоин образует с альфа-нафтолом соединение красного цвета - ацетилметилкарбинол.

Познавательные статьи:



Техника прыжка в длину с разбега

Тактические действия в защите

История Олимпийских игр

История развития права интеллектуальной собственности