Якісне визначення глюкози в біологічних рідинах.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 11 из 14Следующая ⇒

▷ Похожие статьи

Реакція Тромера

Мета: Вивчити механізм взаємодії глюкози з купрум(II) сульфатом у лужному середовищі.

Теоретична частина: Розчини гексоз (наприклад, глюкози або фруктози) у лужному середовищі відновлюють купрум(II) оксид у процесі нагрівання в купрум(I) оксид, а самі окиснюються до альдонових кислот. Цю реакцію за участю глюкози можна записати рівнянням:

CH₂OH(CHOH)₄CОН + 2CuSO₄ + 5NaOH →

CH₂OH(CHOH)₄CООNa + Cu₂O↓+ 2Na₂SО₄ + 3H₂O.

Принцип методу: глюкоза в лужному середовищі відновлює купрум (II) оксид (CuO) в купрум(I) оксид (Cu₂O).

Матеріали та реактиви: біологічна рідина, що містить глюкозу (сеча), розчин з масовою часткою натрій гідроксиду 0,5 %, розчин з масовою часткою купрум (ІІ) сульфату 0,5 %, пробірки, скляні палички, піпетки градуйовані на 5 мл, 1 мл, штатив для пробірок, пальник.

Хід визначення

У пробірку до 3 мл сечі додають 1 мл розчину натрій гідроксиду і 5 крапель розчину купрум (ІІ) сульфату. Спос­терігається поява осаду купруму (II) гідроксиду, що у процесі перемішування або струшування розчиняється, а розчин набуває блакитного забарвлення. Під час його обережного нагрівання в полум'ї пальника до кипіння спостерігається випадіння жовтого осаду купруму (I) гідроксиду чи червоного осаду купрум(I) оксиду.

За результатами досліду зробити висновок про наявність глюкози в досліджуваних біологічних рідинах, сформулювати клініко-діагностичний висновок (стор. 110).

Лабораторна робота № 18

Визначення глюкози в біологічних рідинах

глюкозооксидазним(уніфікованим) методом

Мета: Опанувати кількісний колориметричний глюкозооксидазнийметод визначення глюкози в сироватці крові та за отриманими результатами зробити клініко-діагностичний висновок (стор. 110).

Принцип методу: Глюкоза у присутності ферменту – глюкозооксидази окиснюється киснем повітря до глюконової кислоти:

CH₂OН–(CHOН)₄–СНО+О₂+Н₂О→CH₂OН–(CHOН)₄–СООН+Н₂О₂.

глюкоза глюконова кислота

Перекис водню окиснює хромоген, перетворюючи його в забарвлену у синій колір сполуку. Реакція проводиться у термостаті при температурі 37 ⁰С протягом 15 хвилин, потім зупиняється введенням у розчин сульфатної кислоти. Сульфатна кислота перетворює жовте забарвлення у червоне. Стабільність забарвленого комплексу зберігається протягом 1 години.

Прилади та матеріали: колориметр фотоелектричний концентраційний КФК–2, піпетки градуйовані на 5 мл, 1 мл, 0,1 мл, штатив для пробірок та піпеток, досліджувана сироватка крові.

Робота проводиться з використанням готового набору реактивів.

Реактиви: склад набору: суха суміш реактивів (1 флакон), розчин пероксидази в стабілізаторі (1 амп.), розчин хромогену (1 амп.), розчин з масовою часткою цинк сульфату 10 % (10 мл), барій гідроксид (1 г), спиртовий розчин з масовою часткою фенолфталеїну1 % (1 мл), стандартний розчин глюкози 10 ммоль/л (1 амп.);

розчин з масовою часткою сульфатної кислоти 15 % (не комплектується).

Готування робочих розчинів

1. Ензимний розчин. У хімічний стакан влити 50 мл фізіологічного розчину, кількісно додати вміст флакону сухої суміші реактивів, додати розчин хромогену, розчин пероксидази, перемішати до повного розчинення кристалів. Відфільтрувати через вату. Зберігати в холодильнику до 10 днів.

2. Розчин з масовою часткою сульфатної кислоти Н₂SO₄ 15 % готується у лабораторії.

3. Стандартний розчин глюкози (з молярною концентрацією глюкози 10 ммоль/л) готовий до роботи.

4. Фізіологічний розчин – розчин з масовою часткою натрій хлориду NaCl 0,9 %.

Хід визначення

Приготувати розчин сироватки у фізіологічному розчині: у хімічну пробірку внести 1 мл фізіологічного розчину, додати 0,05 мл сироватки, перемішати. Подальший аналіз здійснюють за таблицею 18.

Таблиця 18

Склад робочих розчинів та хід визначення

Перемішують і через 5 хвилин вимірюють екстинкцію за допомогою колориметру фотоелектричного кон­центраційного КФК–2 у кюветах із товщиною шару 5 мм за довжини хвилі 540 нм (зелений світлофільтр). Робота з приладом описана у розділі 2.1.1.

Розрахунок концентрації глюкози у сироватці крові виконують за формулою:

,

де – концентрація глюкози у сироватці крові (ммоль/л); С_ст. – концентрація глюкози у стандартному розчині (10 ммоль/л); – екстинкція досліджуваної проби; – екстинкція стандартної проби.

Норма глюкози в крові: 2,77 – 5,55 ммоль/л.

Примітка: якщо концентрація глюкози в крові виявиться 15 ммоль/л, пробу необхідно розвести фізіологічним розчином у 2 рази, провести дослідження і результат помножити на 2.

Лабораторна робота № 19

Познавательные статьи:



Алгоритмические операторы Matlab

Конструирование и порядок расчёта дорожной одежды

Исследования учёных: почему помогают молитвы?

Почему терпят неудачу многие предприниматели?