Определение титра комплемента микрометодом

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 9 из 10Следующая ⇒

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРА КОМПЛЕМЕНТА МИКРОМЕТОДОМ

/ Н. С. Мотавкина, Б. М. Ковалев, А. С. Шаронов, 1989/

Приготовить равные объемы гемолитической системы 2% и 2% расплавленной и остуженной до +45С° агарозы. Смесь залить в камеру, приготовлен­ную из двух фотопластин и прокладки между ними. После застывания геля и осторожного удаления верхней пластины сделать в нем с помощью гель-пробойника луноч­ки. В них внести испытуемые и контрольные сыворотки, содержащие комплемент крови, инкубировать во влажной камере 2 часа при 37º С. Активность комплемента определяют по формуле:

, где

Со – активность элемента в опытной сыворотке,

До - диаметр зоны лизиса вокруг опытной сыворотки,

Дк – диаметр зоны лизиса вокруг контрольной сыворотки,

Ск - активность комплемента в контрольной сыворотке

Приложение 4

а) ОПРЕДЕЛЕНИЕ β - ЛИЗИНОВ МИКРОМЕТОДОМ

/по Н.С. Мотавкиной, Б.М. Ковалеву, А.С. Шаронову,1989

Камера заполняется по вышеприведенному описанию смесью расплавленного и остуженного до +45С° 2% раствора агарозы и тест - культуры Bac. subtilis (сенная палочка) в концентрации 10 тыс. м.т./мл. После застывания в геле делают микролунки, куда вносят исследуемый субстрат и соответствующие контроли. Пластины инкубируют при +37 С° 18-24 часа. Расчет активности бета-лизинов проводят по формуле, описанной для комплемента.

б) ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕТА-ЛИЗИНОВ КЛАССИЧЕСКИМ МЕТОДОМ СЕРИЙНЫХ

РАЗВЕДЕНИЙ

Ингредиенты

1:10

1:20

1:40

1:80

1:160

1:320

К.к.

К.с.

МПБ

1,8

-

-

Сыворотка крови больного

0,2

 Тест-микроб Bac. subtilis 600 млн. мт/ в каплях

2к

2к

2к

2к

2к

2к

2к

-

Инкубировать при +37 С° 18 часов

Учет результатов по лизису тест - культуры

ПОЛНЫЙ ЛИЗИС

Нет

лизиса

Рост

тест-культуры

Нет роста

Титр бета-лизинов - 1:160 (максимальное разведение или минимальное количество, дающее лизис) тест – культуры Bac. subtilis (сенная палочка).

Познавательные статьи:



Где возникла философия и почему?

Относительная высота сжатой зоны бетона

Сущность проекции Гаусса-Крюгера и использование ее в геодезии

Тарифы на перевозку пассажиров