Реактивы должны быть использованы только квалифицированным лабораторным персоналом при соблюдении условий техники безопасности.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 2

Стабильность и приготовление реактивов

Все реактивы стабильны до истечения срока годности в поставляемом виде при +2-8°С. Хранить в защищенном от света месте и избегать резких перегревов и переохлаждений.

Реактивы должны быть перемешаны и доведены до температуры анализатора примерно за ½ часа до измерения. Реактивы стабильны в течении 30 дней на борту анализатора при +10°С  

Определение общего гемоглобина

Реактив 1 = Реактив общего гемоглобина

Определение HbA_1c гемоглобина

Реактив 1 = HbA_1c R1 : Антитела

Реактив 2 = HbA_1c R2 : Агглютинатор

Процедура теста

Поставляемые материалы

Гемоглобин денатурирующий реактив              

Реактив общего гемоглобина                                      

HbA_1c R1: Антитела                                                     

HbA_1c R2: Агглютинатор         

Материалы требуемые, но не поставляемые

HbA_1c Калибратор, Cat. No.                  HA 3444

HbA_1c Контроль качества, Cat. No. HA 3445

HbA_1c  Денатурирующий реактив HA 3450

Пробаподготовка

Смешать 10 μl крови с 400 μl гемоглобин денатурирующего реактива (разведение 1:41)

Избегайте вспенивания.

Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре перед измерением.

Подготовленные пробы могут храниться до 8 часов при комнатной температуре или до 48 часов при +2-8ºС в закрытом контейнере.

Процедура определения HbA1c гемоглобина

Длина волны:                                                              600нм

Кювета:                                               световой путь - 1 cm

температура:                                                                  37°C

Измерение:                                                  против воздуха

Пипетировать в пробирки для теста:

                   Микро                           Полумикро

Стандарт

или проба               120 μl                            40 μl        

Реактив 1               1.5 ml                         500 μl

Перемешать и инкубировать 5 мин при 37°C. Затем добавить:‑

                   Микро                           Полумикро

Реактив 2            1.5 ml                             500 μl

Перемешать и инкубировать 20 секунд при 37°C, произвести первое чтение A₁. Инкубировать 120 секунд и снять второе чтение A₂. 

Стандартная кивая и обсчет результатов

A_{стандарт/проба} = A₂ - A₁ (стандарта/пробы)

График  A_{стандарт} против концентрации HbA_1c, приведен во вкладыше к Калибратору, используя полулогарифмическую бумагу для графиков. Концентрация пробы снимается с калибровочной кривой. Не экстраполировать за пределы диапазона значений стандартов.

Процедура определения общего гемоглобина

Длина волны:                                                              600нм

Кювета:                                               световой путь - 1 cm

температура:                                                                  37°C

Измерение:                               против реактивного бланка

Пипетировать в пробирки для теста:

                           Микро                                Полумикро

          Стандарт Реактив Стандарт Реактив

                или проба    Бланк    или проба    Бланк

Стандарт

или проба      200 μl          ‑‑‑            75 μl          ‑‑‑

Дистилли-

рованная

вода                     ‑‑‑    200 μl                ‑‑‑      75 μl

Реактив        3.00 ml  3.00 ml        1.00 ml  1.00 ml

Перемешать и инкубировать 5 мин при 37°C. Затем снять измерение A. 

Подсчет результатов

Общий                       А_пробы  

гемоглобин (гр/дл) =                 Х концентрация

                                       A_{стандарта}    стандарта

Калибровка

HbA_1c гемоглобин

Мы рекомендуем использовать Randox HbA_1c Калибровочные Серии, уровни 1 – 6, для калибровки этого метода. Для получения калибровочной кривой воспользуйтесь значениями концентраций калибратора.

Общий гемоглобин

Мы рекомендуем использовать 0.9% NaCl в качестве бланка и Randox HbA_1c Калибровочные Серии, только 1 уровень, для калибровки этого метода.

Многоточечная калибровка рекомендована для HbA_1c каждые 30 дней, со сменой лота/бутылки реактива.

Внимание. Калибратор НЕ ТРЕБУЕТ пробоподготовки.

Калибраторы проверены с помощью метода ВЭЖХ для HbA_1c и методом Драбкина для общего гемоглобина.

Контроль качества

Randox HbA_1c контроли, Уровень 1 и Уровень 2 рекомендованы для ежедневного контроля качества. Оба уровня контроля должны проводиться как минимум раз в день. Полученные результаты должны попадать в заданный диапазон. В случае если значения не попадают в диапазон и подобная ошибка возникает не однократно, следующие шаги должны быть предприняты:

1. Проверьте настройки анализатора и источник света.

2. Проверьте чистоту используемого оборудования.

3. Проверьте воду на предмет загрязнений (рост бактерий и т.д.)

4. Проверьте температуру реакции.

5. Проверьте сроки годности реактивов, калибраторов и контрольных материалов.

6. Обратитесь в отдел технической поддержки  Randox Laboratories, Northern Ireland (028) 94422413

Внимание: Контрольные материалы ТРЕБУЮТ пробоподготовки после разведения.

Подсчет

Подсчет концентрации гемоглобина A_1c  производится с использованием следующего отношения:

Процентное содержание гемоглобина A_1c

% HbA_1c = HbA_1c (гр/дл)    x 100

                    Общ. Hb (гр/дл)

Ожидаемые значения ^{(6, 12-14)}

Каждая лаборатория должна составить свои таблицы нормальных значений в зависимости от возраста, пола и национальности пациентов.

В зависимости от используемого метода гемоглобин A_1c составляет 4-6% при отсутствии диабета, 6-8% в случае контролируемого диабета и может быть больше чем 20% в случае неконтролируемого диабета.

1024 практически здоровых мужчин и женщин попадающих под категорию «Норма» были тестированы на гемоглобин А_1С этим методом. Ожидаемые значения лежат в диапазоне от 4.5% до 6.2%.

Интерпретация результатов ⁽¹⁵⁾

Метод дает точные и аккуратные результаты по общему гемоглобину в диапазоне от 7 до 23 гр/дл. Пациенты с тяжелыми анемиями (общий гемоглобин < 7гр/дл) и с политемией (общий гемоглобин > 23гр/дл) не должны обследоваться с применением этого метода.

Любые случаи уменьшения время жизни эритроцитов, такие как гемолитическая анемия, другие гемолитические болезни, беременность и т.д. ведут к уменьшению % гликированного гемоглобина.

Пробы, содержащие гемоглобин S и С, могут иметь значения гемоглобина А_1С более чем на 40% превышающие ожидаемые.

Так же, пробы, содержащие гемоглобин F (>10%), могут иметь значения гемоглобина А_1С меньше ожидаемых.

Таким образом, пробы содержащие гемоглобины S, C и F (>10%) не следует сравнивать с опубликованными нормальными значениями

Пробы, содержащие гемоглобин Е, не показали расхождений с нормальными значениями.

Влияющая вещество                       Концентрация до которой

                                               влияние на обнаружено.

Билирубин                           :                513 μmol/l (30 mg/dl)

Триглицериды                     :             18 mmol/l (1600 mg/dl)

Ревматоидный фактор       :                                 2000 IU/ml

Ацетилсалициловая к-та    :                                     60 mg/dl

Натрия цианат                     :                                     50 mg/dl

Мочевина                            :               83 mmol/l (500 mg/dl)

Подвижная фракция гликированного гемоглобина не оказывает влияния, так как используемые антитела являются специфичными к стабильному кетамину.

Аналитический интервал

Для общего гемоглобина интервал составляет от 7 гр/дл до 23 гр/дл.

Для процентного содержания гемоглобина А_1С это концентрации соответствующие уровням калибратора (2,06 гр/дл HbA_1c, 14.7% HbA_1c при концентрации общего гемоглобина 14 гр/дл).)

Пробы с концентрацией больше 14,7% HbA_1c недолжны разводиться и результаты следует представлять, как  >14.7% HbA_1c.

Пределы метода (только HbA_1c)

Интервал для данного метода примерно 0.3 - 2.06 гр/дл.

Эти данные зависят от лотспецифичных значений использованного калибратора.

Линейность (только для общего гемоглобина)

Метод определения общего гемоглобина линеен до 23гр/дл.

Познавательные статьи:



Коммуникативные барьеры и пути их преодоления

Рынок недвижимости. Сущность недвижимости

Решение задач с использованием генеалогического метода

История происхождения и развития детской игры