Предполагаемое использование

↑

▷ Содержание

Стр 1 из 2Следующая ⇒

Данный иммунологический метод направлен на количественное определение in vitro гемоглобина A_1c (HbA_1c) в крови.

Определение HbA_1c  используется при долгосрочном мониторинге сахарного диабета. Этот метод не должен быть использован для диагностики сахарного диабета или ежедневного мониторинга глюкозы.

В некоторых методах причиной ошибочного определения процента HbA_1c может быть подвижная фракция гликированного гемоглобина.

Данный метод не чувствителен к присутствию подвижного HbA_1c так как использованные антитела специфичны к HbA_1c.

№ по каталогу.

HA 3830   

Гемоглобин денатурирующий реактив                3 x 50 ml

Реактив общего гемоглобина                                  3 x 28 ml

HbA_1c R1: Антитела                                                 3 x 14 ml

HbA_1c R2: Агглютинатор                                        3 x 14 ml

Сопутствующие реактивы

HA 3450         

HbA_1c Денетурирующий реактив                    2 x 50 ml

КЛИНИЧЕСКАЯ ВАЖНОСТЬ

Сахарный диабет – это болезнь сопровождающаяся слабым гликемическим контролем. Многие клинические исследования показали, что осложнения, связанные с диабетом, можно уменьшить путем долгосрочного мониторинга и жесткого контроля уровня глюкозы в крови.

У пациентов-диабетиков, уровень глюкозы которых анормально завышен, уровень HbA_1c также завышен, по причине неферментативного гликирования N-конца β-цепи гемоглобина А_о.

Уровень HbA_1c  пропорционален уровню глюкозы в крови и широко применяется как индикатор значения ежедневной концентрации глюкозы в промежутках времени больших чем 6-8 недель.

По этой причине это долгосрочный индикатор при контроле диабета, тогда как измерение глюкозы в крови – краткосрочный показатель.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Измеряются концентрации HbA_1c  гемоглобина и общего гемоглобина в крови. Результат – процентное содержание HbA_1c  гемоглобина от общего гемоглобина крови. Значения полученные для HbA_1c  гемоглобина и общего гемоглобина при использовании этого метода используются для определения отношения HbA_1c  гемоглобин/общий гемоглобин (%HbA_1c) и не должны быть использованы по отдельности для диагностических целей

(a) Пробаподготовка

Первый шаг включает в себя обработку образца крови. Производится лизис эритроцитов и гидролиз гемоглобина под действием протеаз, входящих в Гемоглобин денатурирующий реактив.

(b) Определение общего гемоглобина⁽¹⁰⁾

Реактив общего гемоглобина используется для определения концентрации общего гемоглобина. Метод включает в себя превращение всех производных гемоглобина в гематин в щелочной среде неионного детергента (Wolf et al (1984)).

Реакция инициируется добавлением подготовленного образца к Общему реактиву гемоглобина. Результатом является позеленение раствора. Превращение различных видов гемоглобина в щелочной гематин с одним определенным спектром абсорбции позволяет проводить измерение концентрации общего гемоглобина по конечной точке при длине волны 600 нм.

(c) Определение  HbA_1c

Определение HbA_1c  основано на методе латексного торможения агглютинации.

Агглютинатор, состоящий из синтетического полимера содержащего множественные копии иммунореактивного сегмента HbA_1c, вызывает агглютинацию латексных частиц, покрытых HbA_1c специфичными моноклональными антителами мыши.

При отсутствии HbA_1c в образце, агглютинатор в HbA_1c R2 реактиве и микрочастицы покрытые антителами в HbA_1c R1 реактиве будут агглютинировать, вызывая увеличение абсорбции.

В присутствии HbA_1c  в пробе, уровень агглютинации будет уменьшаться, так как молекулы HbA_1c будут конкурировать с агглютинатором за сайты связывания на латексных частицах.

Таким образом, увеличение абсорбции обратно пропорционально концентрации HbA_1c в пробе.

Увеличение абсорбции, вызванное агглютинацией, измеряют при длине волны 700 нм. Уровень агглютинации используется для подсчета концентрации HbA_1c по калибровочной кривой. Процентное содержание HbA_1c затем подсчитывается из полученных значений для общего гемоглобина и HbA_1c  выраженных в гр/дл.

Сбор и хранение образцов⁽¹¹⁾

В этом методе может быть использована и венозная и капиллярная кровь.

В качестве антикоагулянтов рекомендовано использование ЭДТА или гепарина.

Кровь стаблизированная ЭДТА или гепарином стабильна 6 месяцев при -70°С, 2 недели при +5°С или 1 неделю при +25°С

Замороженные пробы должны быть разморожены при комнатной температуре, перемешаны перед использованием и не должны быть перезаморожены.

Внимание. Все пробы крови должны быть перемешаны непосредственно перед измерением.

Стабильность подготовленных проб

Подготовленные пробы могут храниться до 8 часов при комнатной температуре или до 48 часов при +2-8°С в закрытом контейнере.

При хранение лизированные пробы могут выпасть в осадок. Рекомендуется перемешивать все пробы непосредственно перед анализом.

Если требуется оставить пробы на ночь, рекомендовано оставлять их при +2-8°С

Состав реактивов

Гемоглобин денатурирующий реактив

Свиной пепсин

Буфер

Консервант

pH 2.4

Реактив общего гемогловина

Натрия гидроксид                                                        0.4% w/v

Тритон                                                                          2.5% w/v

Оскилфеноксиполиэтоксиетанол                                2.5% w/v

pH 13

HbA_1c  R1 : Анттела

Частицы покрытые HbA_1c антителами (мышь)      <0.1% w/v

Бычий сывороточный альбумин

Буфер

Неионные ПАВ                                                            0.6% w/v

Проклин 150                                                                0.1% w/v

pH 8.1

HbA_1c R2 : Агглютинатор

HbA_1c гаптен ковалентно пришитый к полимеру

Бычий сывороточный альбумин

Буфер

Проклин 150                                                                0.1% w/v

Неионные ПАВ                                                            0.2% w/v

pH 2.0

Меры предосторожности

Только для in vitro диагностики. Не пипетировать ртом. Соблюдайте обычные меры предосторожности, принятые в лаборатории.

Реактив общего гемоглобина содержит гидроксид натрия, который является едким веществом. В случае попадения на открытые участки кожи промыть пораженные участки кожи большим количеством воды и обратиться за квалифицированной медицинской помощью.

Познавательные статьи:



Как правильно слушать собеседника

Типичные ошибки при выполнении бросков в баскетболе

Принятие христианства на Руси и его значение

Средства массовой информации США