Работа 2. Определение продолжительности жизни эритроцитов.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 18 из 18

Теория вопроса

В большой популяции клеток с известной продолжительностью жизни в каждую единицу времени гибнет определенное количество стареющих клеток. Кроме того, клетки могут подвергнуться неожиданному разрушению, особенно при определенных патологических состояниях.

Измерения выживаемости эритроцитов проводятся в основном для установления продолжительности жизни собственных клеток человека в его кровяном русле, менее часто – продолжительности жизни нормальных донорских клеток в кровотоке больного или клеток больного у здорового реципиента. Изучение выживаемости важно также и при исследовании условий хранения крови, предназначенной для трансфузии, при потере крови, при гемолитических анемиях и т.д.

При установлении продолжительности жизни эритроцитов у экспериментальных животных обычно применяется метчик ⁵⁹Fe (период полураспада 45 дней). В клинической же практике рекомендуется метод мечения эритроцитов ⁵¹Cr – источник γ-лучей (период полураспада – 27,8 дня). ⁵¹Cr имеет медленную скорость элюции (Т_1/2 около 64 дней), он не реутилизируется из распавшихся эритроцитов. Определение продолжительности жизни эритроцитов устанавливается по скорости исчезновения радиоактивного ⁵¹Cr или другого метчика из кровотока. При решении этого вопроса к метчикам предъявляются следующие требования:

а) метчик должен прочно связываться с первоначально помеченными клетками или, если обнаруживается элюция (выведение) метчика, она должна быть незначительной, а её скорость известной, так как неизвестная скорость элюции метчика делает невозможными измерения;

б) метчик не должен повреждать клетки;

в) метчик не должен реутилизоваться после разрушения меченых клеток.

Выбор метчика зависит от задачи исследования. Так, эритроциты метят ³²P, ⁵⁹Fe, ⁵⁵Fe, ⁴²K, ⁸⁶Rb, однако наиболее эффективен в качестве метчика ⁵¹Cr.

Метод метки эритроцитов ⁵¹ Cr

В шприц, содержащий 3 мл кислого цитратно-глюкозного раствора (двузамещённый цитрат натрия – 2г, глюкоза –3г, вода – 120 мл), набирают около 10 мл крови. Содержимое шприца переливают в центрифужный стакан и центрифугируют на малых оборотах. Плазму, стабилизированную АСД, удаляют и используют для приготовления промывного раствора (2-3 % плазма на стерильном физиологическом растворе). Около 100 мкКи высокой удельной активности Na₂⁵¹CrO₄ (стерильный изотонический раствор) добавляют к уплотнённым клеткам, и смесь инкубируют около 30 мин при комнатной температуре. Наибольший процент включения ⁵¹Cr отмечается чаще в присутствии цитрата, чем гепарина, и больше в уплотнённых клетках, чем в цельной крови.

После инкубации эритроциты дважды промывают 2 % плазмой на стерильном изотоническом растворе и ресуспендируют в растворе плазмы. Известное количество этой суспензии (10 мл) вводят внутривенно. Затем через 15 мин или более (при полном смешивании меченых клеток с эритроцитами кровотока) забирают кровь без стаза из вены противоположной стороны, а не из той, куда была введена суспензия. Последующие образцы крови берут через интервалы в 5-6 дней и так до 25–го дня. Счет радиоактивных импульсов производят сцинтилляционным счетчиком. По полученным данным величины активности образцов строится кривая в полулогарифмических координатах и по кривой определяется время снижения активности на ½ - время полужизни эритроцитов (Т_½).

Пример. Активность пробы с мечеными эритроцитами через 24 ч после введения ⁵¹Cr составила 2000 имп./мин. По таблице 5-1 определяем процент активности ⁵¹Cr в момент его введения, зная при этом срок жизни к данному времени. Допустим, что срок жизни ⁵¹Cr к началу введения равнялся 22 дням, следовательно, процент активности на 23 день жизни ⁵¹Cr будет равен 56,2 % от исходной величины (100 %). Затем определяют активность пробы через несколько дней (например, через 5 дней), нами получено 1300 имп./мин.

Процент активности ⁵¹Cr на 28-й день, определяемый по таблице, уже составил 49,6 % от первоначальной величины. Следовательно, за 5 дней произошло снижение активности ⁵¹Cr, поэтому необходимо внести поправку на этот распад, т.е. подсчитать количество импульсов, приходящихся на процент снижения активности ⁵¹Cr.

Таблица 19-1

Распад ⁵¹ Cr

В нашем случае процент активности пробы равняется 6,6 %.

56,2 % - 49,6 % = 6,6 %

составляем пропорцию и определяем количество импульсов:

2000 имп/мин. – 56,2 %

Х - 6,6 %

Х = 2000 ∙ 6,6     = 235 имп/мин.

         56,2

следовательно, активность пробы с поправкой на распад ⁵¹Cr будет равна:                           1300 + 235 = 1535 имп/мин.

активность пробы в % от исходного:

2000 имп/мин. – 100 %

1535 имп/мин. – Х

Х = 76,7 %

Поправка на элюцию на 5-й день составляет 1,057 (табл. 5-2). Следовательно, выживаемость эритроцитов ко дню опыта (на 5-ый день) будет равна                    76,7 % ∙ 1,057 = 81 %

Таблица 19-2

Поправка на элюцию ⁵¹ Cr

Для определения срока жизни эритроцитов результаты всех измерений наносят на график в полулогарифмическом масштабе. По оси абсцисс отмечают время в днях, а по оси ординат – процент выживших эритроцитов ко дню опыта. По графику устанавливают время в днях, за которое концентрация ⁵¹Cr снижается вдвое (до 50 % от исходной радиоактивности). Эту величину называют временем полужизни меченых эритроцитов. Полученные величины являются относительными.

Срок полужизни эритроцитов в норме у человека составляет 30 + 5 дней, в то время как при гемолитических анемиях он уменьшается до 5-15 дней.

Задача к практическому занятию:

Дано: в день введения ⁵¹Cr срок его жизни – 22 дня.

Активность пробы после введения составила:

через 24 ч – 1900 имп./мин

через 5 дней – 1300 имп./мин

через 8 дней – 1000 имп./мин

через 11 дней – 600 имп./мин

через 15 дней – 300 имп./мин

Определите процент выживаемости эритроцитов в каждый из указанных сроков и на основании полученных данных постройте кривую выживаемости эритроцитов и определите время полужизни эритроцитов.

Вопросы для обсуждения:

1. В каких случаях необходимо знать о продолжительности жизни эритроцитов?

2. В чем преимущества и недостатки радиоактивного хрома, применяемого в гематологических исследованиях?

ЛИТЕРАТУРА

ОСНОВНАЯ

1.  Акиев Р.М, Атаев А.Г., Багненко С.С. Лучевая диагностика: т.1 ГЭОТАР-Медиа, 2007.

2. Малаховский В.Н., Труфанов Г.Е., Рязанов В.В. Радиационная безопасность при радионуклидных исследованиях. Учебно-методическое пособие для врачей. – Санкт-Петербург: ЭЛБИ-СПБ, 2008

3. Козлов Ю.А., Новицкий В.В., Байков А.Н. Радионуклиды в медико-биологических исследованиях. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 1994.

4.Радионуклидная диагностика для практических врачей. Учебное пособие / Под ред. Ю.Б. Лишманова, В.Н. Чернова. – Томск: STT, 2004.

5. Терновой С.К., Синицын В.Е. Лучевая диагностика и терапия: учебное пособие ГЭОТАР-Медиа, 2009.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ:

6. Кинетические аспекты гемопоэза / Под ред. Г.И. Козинца, Е.Д. Гольдберга. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 1982

7. Уразова О.И., Новицкий В.В. Лабораторная диагностика гематологических синдромов и болезней. Учебное пособие. – Томск: Изд-во Печатная мануфактура, 2008.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Ответы на тестовые задания:

Занятие 1.

1 - 3;   2 - 4;   3 - 3; 4 - 2;   5 - 2;   6 - 3;   7 - 4; 8 - 4;   9 - 3.

Занятие 4.

  1 - 4;   2 - 3;   3 - 2; 4 - 3;   5 - 4;   6 – 3;   7 - 2,5;    8 – 2;    9 – 1,2,5;  10 – 4;      11 – 5;   12 – 1;   13 – 4.

Занятие 5.

  1 - 4;   2 - 1;   3 - 3;    4 - 1;   5 - 5;   6 - 3;    7 - 3;   8 - 1;   9 – 1,3.

Занятие 6.

1 – 1,2,4;   2 - 2;   3 - 4; 4 - 3;    5 - 4; 6 - 5; 7 - 3;    8 - 1,3;   9 - 2;   10 - 1.

Занятие 13.

1 - 1;   2 – 1,2,3,6,7;   3 – 2,3,4,5;   4 - 2,4,6,7; 5 – 1;   6 – 1,2,3,4,5,6.

Ответы на ситуационные задачи:

Занятие 2.

Задача 1. Доза поглощенная – 0,13 Гр. Доза эквивалентная – 0,41 Зв.

Задача 2. У первого пациента – 0,05 Зв; у второго – 0.50 Зв; у третьего – 1,00 Зв. Гамма и нейтронное облучение может быть использовано при лечении опухолей различных локализаций, альфа лучи – для опухолей поверхностных локализаций.

Задача 3. Доза экспозиционная – 0,011 Р.

Задача 4. Доза экспозиционная – 0,1 Р.

Занятие 14.

Задача 1 -3.

Задача 2- 2

Задача 3 -2.

Задача 4 -2

Задача 5 -3.

Задача 6- 2.

Задача 7 -3.

Задача 8. ОЛБ. Желудочно-кишечный синдром.

Задача 9. ХЛБ.1-й степени тяжести.

Задача 10. ХЛБ.2-я степень тяжести, период формирования.

Задача 11. ХЛБ.1-й степени тяжести.

Занятие 17.

Задача 1. Катаракта левого глаза, стойкая эпиляция бровей и ресниц.

Задача 2. Глаукома, катаракта обоих глаз, хромосомные аберрации в клетках костного мозга, остеопороз, очаговая эпиляция.

 Задача 3. Гипоплазия кроветворения – результат действия ионизирующей радиации. Лейкозы относят к стохастическим отдаленным эффектам.

Занятие 18.

Задача 1 - 1.

Задача 2. ¹³¹I.

Задача 3. ^99mTc.

Задача 4-2.

Задача 5.Нет, ввиду малой проникающей способности β- частиц, испускаемых радионуклидом.

Задача 6-2.

Задача 7. 0,0027 мл.

Задача 8. ОЦЭ - 2,0 л; ОЦК - 4,4л.

Задача 9. ОЦК – 5,0л; ОЦП - 3,0 л.

Познавательные статьи:



Как правильно слушать собеседника

Типичные ошибки при выполнении бросков в баскетболе

Принятие христианства на Руси и его значение

Средства массовой информации США