Испытание на отсутствие энтеробактерий, устойчивых к желчи

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 73 из 81Следующая ⇒

Для восстановления жизнеспособности возмож- ных микроорганизмов-контаминантов используют предварительную инкубацию образца лекарственного средства в жидкой питательной среде.

10,0 г или 10,0 мл исследуемого образца перено- сят в 100 мл соево-казеинового бульона (или среды

№ 8), перемешивают и инкубируют при температуре (22,5±2,5) °С в течение, как правило, двух часов, но не более пяти. После инкубации перемешивают со- держимое флакона (гомогенат А) и переносят 10 мл (количество, соответствующее 1 г или 1 мл образца) в 100 мл среды обогащения (бульон Мосселя). Посевы инкубируют в течение 24-48 ч в стандартных услови- ях. При появлении роста делают пересев бактериоло- гической петлей на агар Мосселя или среду № 4, кото- рую инкубируют в течение 18-24 ч.

Если на агаре Мосселя выявлены типичные ко- лонии бактерий, по тинкториальным свойствам представляющие собой грамотрицательные неспо- рообразующие палочки, обладающие ферментом ци- тохромоксидаза, считают, что образец контаминиро- ван энтеробактериями, устойчивыми к желчи.

Количественное определение энтеробактерий, устойчивых к желчи

Для посева используют три пробирки с 9 мл бульо- на Мосселя в каждой. Гомогенат А в количестве 1 мл (соответствует 0,1 г или 0,1 мл образца) вносят в пер- вую пробирку, тщательно перемешивают и переносят 1 мл (соответствует 0,01 г или 0,01 мл образца) во вто- рую пробирку, снова перемешивают и переносят 1 мл (соответствует 0,001 г или 0,001 мл образца) в третью пробирку, меняя пипетку после каждого шага. Посевы инкубируют в течение 24-48 ч. Для подтверждения от- сутствия энтеробактерий, устойчивых к желчи, дела- ют пересев бактериологической петлей из каждой про- бирки с видимым ростом на агар Мосселя (среда №4) и инкубируют чашки Петри в течение 18-24 ч. Прово-

дят микроскопическое исследование обнаруженных на плотной среде колоний. Выявление грамотрица- тельных неспорообразующих бактерий в виде палочек свидетельствует о присутствии в ЛС энтеробактерий, устойчивых к желчи. Наиболее вероятное количество устойчивых к желчи энтеробактерий в 1 г или 1 мл об- разца определяют по таблице 52.

Интерпретация результатов количественного определения энтеробактерий, устойчивых к желчи

Таблица 52

среды в щелочную сторону (изменению цвета среды из зеленого в синий). Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности со- ево-казеинового бульона (или среды № 15) при добав- лении реактива Ковача.

Если в ходе исследования обнаружены типичные бактерии, по тинкториальным свойствам представля- ющие собой грамотрицательные палочки, обладаю- щие ферментом цитохромоксидаза, не утилизирую- щие цитрат натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контаминировано бактериями

Соответствующее количество испытуемого

образца

0,1 г (мл)       0,01 г (мл)     0,001 г (мл)

Наиболее

вероятное количество

E. coli.

Количественное определение

1 мл гомогената А

1 мл гомогената А в разведении 1:10

1 мл гомогената

А в разведении

бактерий в 1 г (мл) образца

Бактерий E. coli

Количественное определение E. coli проводят

                                                               1:100                             

Обозначения: + — наличие роста; – — отсутствие роста

Познавательные статьи:



Психологические особенности спортивного соревнования

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Занятость населения и рынок труда

Социальный статус семьи и её типология