Тема 6 Индикация вирусов в куриных эмбрионах

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 6 из 15Следующая ⇒

Цель занятия: овладеть методами вскрытия заражённых куриных эмбрионов и отбора вируссодержащего материала, ознакомиться с патологоанатомическими изменениями в курином эмбрионе; овладеть методикой капельной реакции гемагглютинации (РГА).

Заражённые эмбрионы ежедневно овоскопируют. Гибель эмбрионов в первые 24 часа после заражения чаще всего обусловлена размножением контаминантов (бактериальная микрофлора, грибы и др.), внесённых в эмбрион при заражении, а также травмированием. Эту гибель считают неспецифической и такие эмбрионы выбраковывают. В более поздние сроки гибель эмбриона, вероятно, вызвана репродукцией вируса.

В процессе инкубации в клетках структур куриного эмбриона вирус репродуцируется и накапливается в соответствующих полостях (аллантоисной, амниотической, желточном мешке). Эмбрионы инкубируют до максимального накопления вируса, что в среднем составляет от двух до восьми суток (зависит от вида/штамма вируса). Например, для вируса ньюкаслской болезни штамма Н, срок инкубации составляет два-три дня, для штамма В₁ – пять дней; для вируса инфекционного ларинготрахеита – пять дней; вируса оспы кур – шесть дней и т.д. 

Эмбрионы, погибшие до истечения полного срока инкубации, и выжившие, но срок их инкубации уже закончился, охлаждают при 0 - +4ºС (на два – три часа помещают в холодильник) для уплотнения тканей эмбриона, что значительно облегчает их вскрытие. Кроме того, при охлаждении кровь в сосудах сворачивается, что предупреждает кровотечение и возможность спонтанной адсорбции вирусов на эритроцитах в процессе вскрытия эмбриона и отбора вируссодержащего материала.

1 – не заражённый куриный эмбрион 2 – куриный эмбрион в форме «таблетки 3 – мумификация и карликовость куриного эмбриона

Рис. 10 Схема реакции гемагглютинации

Методика вскрытия куриных эмбрионов зависит от того, каким вирусом был заражён эмбрион, т.е. в какой структуре вирус репродуцировался и накапливался.

Вскрытие проводят в боксе с соблюдением правил работы с вируссодержащим материалом.

Вскрытие куриного эмбриона, заражённого в аллантоисную полость

Рис. 11 Отбор аллантоисной жидкости

1 Эмбрион помещают в штатив тупым концом вверх, скорлупу эмбриона обрабатывают 70° спиртом и фламбируют. 2 Срезают скорлупу над границей воздушной камеры. 3 Пинцетом надрывают подскорлупную оболочку и ХАО под ней со стороны зародыша (чтобы предотвратить случайный разрыв стенки желточного мешка и предотвратить смешивание его содержимого с аллантоисной жидкостью).

4 Отводят тело зародыша к центральной оси, из образовавшейся полости отбирают аллантоисную жидкость и ставят капельную РГА. Объём жидкости может достигать 10-15,0 мл (рис. 11).

Вскрытие куриного эмбриона, заражённого на ХАО

1 В зависимости от способа заражения эмбрион помещают в штатив вертикально тупым концом вверх (заражение через естественную воздушную камеру), или горизонтально (заражение через искусственную воздушную камеру). Скорлупу над воздушной камерой обрабатывают 70° спиртом и фламбируют.

2 Срезают скорлупу над той воздушной камерой, через которую заражали. При этом ножницы не должны повреждать подскорлупную оболочку под воздушной камерой.

3 ХАО осматривают, приподнимая её пинцетом, и выявляют в ней патологоанатомические изменения. Та часть ХАО, на которую был инокулирован вируссодержащий материал, обычно имеет наиболее выраженные изменения.

4 ХАО фиксируют пинцетом и вырезают по всей площади эмбриона, отслаивая её от скорлупы.

5 Переносят извлечённую ХАО в чашку Петри и тщательно промывают физиологическим раствором.

6 Расправив ХАО в один слой, просматривают её на тёмном фоне.

   Вскрытие куриного эмбриона, заражённого в амниотическую полость и в тело зародыша

Рис. 12 Отбор амниотической жидкости	1 Эмбрион помещают в штатив тупым концом вверх, скорлупу эмбриона обрабатывают 70° спиртом и фламбируют. 2 Срезают скорлупу над границей воздушной камеры. 3 Удаляют аллантоисную жидкость. Пинцетом, удерживая оболочку амниона над головой зародыша, отбирают амниотическую жидкость между головой и телом зародыша (в области шеи). Объём жидкости может достигать 1,0 мл (рис. 12).
Рис. 13 Извлечение тела зародыша	4 Извлекают тело зародыша, удерживая его пинцетом за шею (рис. 13). 5 Переносят зародыш в чашку Петри. 6 Проводят патологоанатомический осмотр тела зародыша и внутренних органов.

Вскрытие куриного эмбриона, заражённого в желточный мешок

1 Эмбрион помещают в штатив тупым концом вверх, скорлупу эмбриона обрабатывают 70° спиртом и фламбируют.

2 Делают насечки на скорлупе по всему периметру. Аккуратно раздвигают две половинки скорлупы над чашкой Петри.

3 Извлекают зародыш со всеми оболочками (рис. XVI).

4 Выделяют желточный мешок с содержимым, стенку разрезают ножницами и отполаскивают от содержимого физиологическим раствором.

Отобранный вируссодержащий материал можно подвергнуть бактериологическому контролю.

Методика постановки капельной реакции гемагглютинации

1 На керамическую пластину наносят каплю аллантоисной жидкости и добавляют к ней каплю 5,0 % суспензии эритроцитов определённого вида животного и перемешивают.

2 Реакцию учитывают визуально через 1 – 3 мин. по наличию хлопьев агглютинированных эритроцитов (рис. XVII).

Материальное обеспечение: заражённыекуриные эмбрионы, 5 % суспензия эритроцитов, овоскоп, штативы для куриных эмбрионов, лоток эмалированный, стерилизатор со стерильным инструментарием (ножницы глазные, пинцет анатомический), механический дозатор с наконечниками, чашка Петри, керамическая пластина, газовая горелка, 70° этиловый спирт, ватные тампоны, термостат.

Примерный план занятия (2 часа)

1 Проведение тестирования студентов 

2 Объяснение преподавателя по теме занятия.

3 Демонстрация: а) методов вскрытия куриных эмбрионов и отбора вируссодержащего материала; б) методики постановки капельной РГА.

4 Самостоятельная работа студентов: а) вскрытие куриных эмбрионов и отбор вируссодержащего материала; б) постановка капельной РГА.

4 Подведение итогов занятия

5 Задание к следующему занятию

Контрольные вопросы

1 Какие признаки репродукции вирусов обнаруживают в курином эмбрионе?

2 Какие патологоанатомические изменения могут быть в структурах эмбриона?

3 В чём состоит методика вскрытия куриного эмбриона, заражённого в аллантоисную полость?

4 В чём состоит методика вскрытия куриного эмбриона, заражённого на ХАО?

5 Что такое гемагглютинирующая активность вируса?

6 В какой реакции проводят индикацию гемагглютинирующих вирусов?

Познавательные статьи:



Техника прыжка в длину с разбега

Организация работы процедурного кабинета

Области применения синхронных машин

Оптимизация по Винеру и Калману