Заглавная страница
Избранные статьи
Случайная статья
Познавательные статьи
Новые добавления
Обратная связь
FAQ
Написать работу

ТОП 10 на сайте

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Техника нижней прямой подачи мяча.

Франко-прусская война (причины и последствия)

Организация работы процедурного кабинета

Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний

Коммуникативные барьеры и пути их преодоления

Обработка изделий медицинского назначения многократного применения

Образцы текста публицистического стиля

Четыре типа изменения баланса

Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву

Мы поможем в написании ваших работ!

ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Влияние общества на человека

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Практические работы по географии для 6 класса

Организация работы процедурного кабинета

Изменения в неживой природе осенью

Уборка процедурного кабинета

Сольфеджио. Все правила по сольфеджио

Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления

Главная Избранные Случайная статья Познавательные Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу

Тема 1 Техника безопасности при работе с вирусами

↑

Стр 1 из 15Следующая ⇒

Введение

Вирусы – это мельчайшие возбудители инфекционных болезней человека, животных, растений, которые не имеют клеточного строения, содержат собственный генетический материал, репродуцируются только в живых клетках «хозяина» и могут существовать вне клетки в форме вирионов. Вирионы вирусов внедряют свой генетический материал в другие клетки или в другой организм и становятся внутриклеточными генетическими паразитами.

Заболевания, вирусная природа которых в настоящее время установлена, в течение многих столетий наносили значительный ущерб сельскому хозяйству и вред здоровью человека. Многие из них были описаны уже давно, однако, попытки установить их причину и обнаружить возбудителя долгое время оставались безуспешными.

Открытие вирусов принадлежит русскому учёному ботанику – Дмитрию Иосифовичу Ивановскому (1864 – 1920 гг.). Он доказал существование нового типа возбудителя - вируса мозаичной болезни табака на основе единственной его физико-химической характеристики. Этот возбудитель обладал способностью «проходить» через бактериальные фильтры, т.е. был намного меньше бактериальной клетки. Позднее Лефлером и Фрошем был открыт вирус ящура (1897 г.), Ридом и Кэрролом - вирус желтой лихорадки (1898 г.). Новые агенты получили название вирус (virus), что означало «заразный яд». Среди объектов живой природы наряду с про – и эукариотами они составили «третье царство», условно названное Vira.

По мере изучения их природы формировались представления о вирусах, как мельчайших биологических агентах, способных к размножению и обладающих наследственностью. Создание электронного микроскопа позволило увидеть вирусы и получить их изображение. Дальнейшее развитие естественных наук на молекулярном уровне значительно стимулировало развитие вирусологии. Молекулярные методы исследования показали, что как и в клетках про– и эукариот, генетическая информация у вирусов заключена в нуклеиновых кислотах. Однако, если у первых генетическую информацию несут только молекулы ДНК, то у вирусов – оба типа нуклеиновых кислот – и ДНК, и РНК. На основании этого различают ДНК – геномные и РНК – геномные вирусы.

Дальнейшее изучение молекулярной биологии вирусов показало определённое противоречие раннему представлению о вирусах, как микроорганизмах. Так, у вирусов отсутствует обмен веществ, собственные белоксинтезирующие (рибосомы) и энергетические (митохондрии) системы. В отличие от бактерий и простейших вирусы являются генетическими паразитами и «конкурируют» с геномом самой клетки. Нуклеиновые кислоты вирусов довольно разнообразны. По форме они бывают линейными или кольцевыми (циркулярными), по количеству цепей – одноцепочечными или двуцепочечными, а также непрерывными или фрагментированными (сегментированными). Они заключены в капсид из белковых молекул и называются простыми (безоболочечными) вирусами. Однако, у некоторых вирусов есть дополнительная внешняя суперкапсидная оболочка – пеплос, состоящая из вирусных белков, а также углеводов и липидов самой клетки и они называются сложными (оболочечными) вирусами.

Вирусы репродуцируются только в клетках и по своему уникальному способу, который отличается от размножения всех других клеток и организмов (бинарное деление, почкование и др.). Он получил название – дизъюнктивный, т.е. разобщённый в пространстве, когда одни структуры вириона синтезируются в ядре, другие – в цитоплазме клеток; и во времени, когда вначале синтезируются вирусные белки, затем нуклеиновых кислот, и только после этого происходит сборка вирионов и их выход из клеток.

Тема 4 Культивирование вирусов.

Тема 11 Серологические реакции в вирусологии.

Тема 12 Реакция иммуноферментного анализа (ИФА)

Цель занятия: изучить реакцию иммуноферментного анализа; ознакомится с визуальным учётом результатов иммуноферментного анализа

Реакция иммуноферментного анализа – ИФА или другое её название ELISA (от англ. enzyme-linked immunosorbent assay) занимает одно из ведущих мест в современной диагностике и профилактике вирусных болезней человека и животных. ИФА позволяет с высокой степенью достоверности проводить качественное выявление вирусных антигенов в ранней диагностике вирусных болезней и количественную оценку вирусных антигенов при изготовлении вакцин, диагностических препаратов и т.п.

ИФА используют и для определения уровня антител в ретроспективной серодиагностике вирусных болезней, при проведении мониторинга эпизоотической обстановки, при изучении механизмов формирования иммунитета и роли различных факторов иммунной системы в патогенезе вирусных болезней.

В основе ИФА лежит принцип взаимодействия между антигенами (АГ) вируса и специфическими антителами (АТ), связанными с ферментом (АТ–ф – конъюгат), с образованием комплекса антиген – антитело (АГ–АТ–ф). Индикатором в реакции является ферментно–чувствительное вещество (субстрат), которое при окислении вызывает окрашивание реакционной смеси (рис. 26).

АГ АТ-ф АГ-АТ-ф субстрат цветное окрашивание

Рис. 26 Схема реакции иммуноферментного анализа

В качестве метки специфических антител при синтезе конъюгата для ИФА часто использую фермент – пероксидазу, полученную из стебля хрена. И тогда на этапе индикации комплекса АГ–АТ-ф вносят смесь из перекиси водорода и хромогена (субстрат). Под действием пероксидазы перекись водорода расщепляется с высвобождением свободного кислорода, который в свою очередь окисляет хромоген с образованием цветного продукта реакции.

Результат реакции можно учитывать визуально. Однако, такой учёт реакции является субъективным и не всегда даёт возможность получить достоверный результат. Наиболее объективный результат получают путём определения оптической плотности раствора в спектрофотометре, которая изменяется в соответствие с повышением концентрации продуктов цветной реакции.

Для индикации и идентификации вирусных антигенов чаще других используют вариант ИФА, получивший название – метод двойных антител или «сэндвич» вариант ИФА (рис. 27), в котором в качестве твёрдого носителя используют многолуночные полистироловые планшеты.

Методика «сэндвич» варианта ИФА

	1 Вносят в лунки планшета по 100,0 специфических противовирусных антител и инкубируют. Затем удаляют антитела, лунки промывают буфером.
	2 Вносят в опытные лунки планшета по 100,0 мкл исследуемого вируссодержащего материала, в контрольные лунки – такой же объём положительных и отрицательных контрольных образцов антигенов и инкубируют. Затем удаляют антигены, лунки промывают буфером.
	3 Вносят в лунки планшета по 100,0 мкл специфического ферментативного конъюгата и инкубируют. Затем удаляют конъюгат, лунки промывают буфером.
Рис. 27 Схема «сэндвич» варианта ИФА	4 Вносят в лунки планшета по 100,0 мкл субстратно – хромогенной смеси и инкубируют. Реакцию останавливают добавлением стоп – раствора.
5 Учёт реакции проводят путем сканирования оптической плотности (ОП) на спектрофотометре (ридер). Зависимость между ОП и антигеном прямо пропорциональная: чем больше концентрация антигена в растворе, тем выше значение ОП. В случае визуального учёта реакции сравнивают цвет растворов с антигенами в опытных и контрольных лунках.

Для обнаружения антител в сыворотке крови животных и определения титра антител используют непрямой вариант ИФА (рис. 28).

Методика непрямого варианта ИФА

	1 Вносят в лунки планшета по 100,0 мкл специфического антигена и инкубируют. Затем удаляют антиген, лунки промывают буфером.
	2 Вносят в опытные лунки планшета по 100,0 мкл исследуемых проб сыворотки крови, в контрольные лунки – такой же объём положительных и отрицательных контрольных образцов сыворотки крови и инкубируют. Затем удаляют сыворотку, лунки промывают буфером.
	3 Вносят в лунки планшета по 100,0 мкл антивидового ферментативного конъюгата и инкубируют Затем удаляют конъюгат, лунки промывают буфером.
Рис. 28 Схема непрямого варианта ИФА	4 Вносят в лунки планшета по 100,0 мкл субстратно – хромогенной смеси и инкубируют. Реакцию останавливают добавлением стоп – раствора.
5 Учёт реакции проводят путем сканирования ОП. Зависимость между ОП и антителами в сыворотке прямо пропорциональная: чем больше концентрация антител, тем выше значение ОП. В случае визуального учёта реакции сравнивают цвет растворов с антителами в опытных и контрольных лунках.

Достоинствами метода ИФА является его высокая чувствительность и специфичность, возможность использования в ранней диагностике болезни и в изучении динамики инфекционного процесса. Кроме того, простая методика выполнения реакции, вплоть до полной её автоматизации, позволяет одновременно проводить достаточно большое число исследований.

Однако, этот метод не исключает возможность получения и некоторого процента «ложных результатов» исследований, а также требует высоких затрат на высокотехнологичное оборудование и коммерческие тест-системы в особенности зарубежных производителей.

Материальное обеспечение: коммерческая тест-система для постановки ИФА; механические дозаторы одно- и восьмиканальные с одноразовыми наконечниками; расходные материалы.

Примерный план занятия (2 часа)

1 Проведение тестирования студентов

2 Объяснение преподавателя по теме занятия

3 Демонстрация методики постановки ИФА

4 Самостоятельная работа студентов

5 Подведение итогов занятия

6 Задание к следующему занятию

Контрольные вопросы

1 В чём принцип реакции иммуноферментного анализа?

2 Какие задачи можно решать с помощью ИФА?

3 В чём состоит методика сэндвич – ИФА?

4 Какой вариант ИФА используют для титрования сыворотки крови?

5 Как проводят учёт результатов ИФА?

6 Какие есть достоинства и недостатки в методе ИФА?

Тема 15 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА)

Цель занятия: изучить реакцию непрямой гемагглютинации; ознакомиться с методами производства эритроцитарных диагностикумов; овладеть методикой определения титра антител в реакции непрямой гемагглютинации.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) заключается в том, что эритроциты, на которых предварительно и необратимо адсорбированы или специфические антигены вируса, или специфические противовирусные антитела, приобретают способность агглютинироваться в присутствии или гомологичных антител, или гомологичных антигенов вируса.

Реакцию учитывают визуально по агглютинации эритроцитов, которые используются в реакции как носители адсорбированных на них специфических белков (АГ или АТ). Положительный результат РНГА – это «зонтик», отрицательный – «пуговка».

Следует отличать РНГА от РГА. В РГА эритроциты агглютинируются в результате взаимодействия их рецепторов с гемагглютинирующими белками вируса (гемагглютитнины) (рис. 30), в РНГА – через комплекс АГ–АТ (рис. 31).

	+
эритроциты	вирусные антигены			агглютинация эритроцитов

Рис. 30 Схема реакции гемагглютинации (РГА)

эритроцитарный антигенный (антительный) диагностикум

антитела в агглютинация эритроцитов

сыворотке крови

(или вирусные антигены)

Рис. 31 Схема реакции непрямой гемагглютинации

Эритроциты, сенсибилизированные вирусными антигенами, называются эритроцитарным антигенным диагностикумом. Он используется в РНГА для обнаружения антител в сыворотке крови и определения титра антител.

Эритроциты, сенсибилизированные специфическими антителами, называются эритроцитарным антительным диагностикумом. Он используется в РНГА для индикации и идентификации вирусов.

Этапы приготовления эритроцитарных диагностикумов

1 Получают эритроциты от барана или птицы (куры, индейки, утки) по общепринятой методике.

2 Стабилизируют эритроциты 50,0 %-ным раствором формалина. Для этого 50 %-ную взвесь отмытых изотоническим раствором хлорида натрия и осаждённых центрифугированием при 1000 об/мин. в течение 15 мин. эритроцитов соединяют с равным объёмом (1:1) 50,0 %-ного раствора формалина. Инкубируют при 37°С в течение двух часов с периодическим перемешиванием через каждые 30 мин. Затем трижды отмывают 0,15 М раствором NaCl (рН 7,2).

3 Танизируют эритроциты путём смешивания равных объёмов (1:1) 3,0 %-ной взвеси эритроцитов на физиологическом растворе (рН 7,2) и раствора танина в разведении 1:20 000. Инкубируют 10-15 мин. при 37°С и центрифугируют при 1000 об/мин. в течение 15 мин. Удаляют надосадочную жидкость, осадок танизированных эритроцитов трёхкратно промывают фосфатным буферным раствором (рН 7,2).

4 Готовят для сенсибилизации 10 %-ную взвесь эритроцитов на 0,15 М фосфатном буфере (рН 6,4) и смешивают с равным объёмом (1:1) специфических вирусных антигенов. Инкубируют 60 минут при температуре 37° С, перемешивая через каждые 15 мин. Затем центрифугируют при 1000 об/мин. в течение 15 мин. и трижды промывают фосфатным буферным раствором (рН 7,2).

5 Разводят осадок сенсибилизированных эритроцитов до 1,0 %-ного раствора в фосфатном буферном растворе (рН 7,2) с добавлением одного процента сыворотки кролика (для стабилизации эритроцитов).

6 Хранят готовые эритроцитарные диагностикумы при температуре +2-+8° С и используют в РНГА в соответствии с инструкцией по применению.

Методика определения титра антител в РНГА с использованием эритроцитарного антигенного диагностикума

РНГА ставят микрометодом в специальных иммунологических 96-луночных планшетах.

1 Готовят последовательные двукратные разведения исследуемой пробы сыворотки крови. Для этого в лунки вносят по 50,0 мкл физиологического раствора (рН 7,2). В лунку № 1 вносят 50,0 мкл исследуемой сыворотки, перемешивают и переносят 50,0 мкл в лунку № 2, перемешивают и 50,0 мкл переносят в лунку № 3 и так далее до пятой лунки. Из лунки № 5 после перемешивания удаляют 50,0 мкл разведённой сыворотки (1:32).

2 Одновременно в лунках №№ 6, 7, 8, 9 ставят следующие контроли:

в лунку № 6 (контроль исследуемой сыворотки крови на наличие гемагглютининов) вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл неразведённой сыворотки крови; в лунку № 7 (контроль эритроцитарного диагностикума на самоагглютинацию) вносят 50,0 мкл физиологического раствора; в лунку № 8 (контроль активности эритроцитарного диагностикума) вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл сыворотки специфической (SS); в лунку № 9 (контроль специфичности эритроцитарного диагностикума) вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл сыворотки отрицательной (SN).

3 Вносят во все лунки (кроме лунки № 6) 50,0 мкл эритроцитарного антигенного диагностикума (ЭAS), в лунку № 6 - 50,0 мкл не сенсибилизированных эритроцитов.

4 Инкубируют 1 час при комнатной температуре.

5 Учитывают результаты РНГА по гемагглютинации

6 Определяют титр антител в исследуемой сыворотке крови

За титр антител в РНГА принимают то наибольшее разведение сыворотки крови, которое ещё вызывает агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов не менее, чем на два креста (++).

Протокол определения титра антител в РНГА представлен в таблице 13.

Таблица 13

Протокол определения титра антител в РНГА

№№ лунок	1	2	3	4	5	6	7			8		9

Компоненты

Реакции

Разведения сыворотки Sх

КОНТРОЛИ

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

ЭА S

1 Физ.р-р (мкл)

50,0

50,0

50,0

2 Исследуемая сыворотка Sх

50,0

Перенос по 50,0

50,0

–

3 Сыворотка специфическая SS

–

50,0

–

4 Сыворотка отрицательная SN

–

50,0

5 ЭА S

50,0

–

50,0

50,0

6 Эр. не сенси- билизированные

–

50,0

–

6 Учёт результата

+++

–

+++

–

Согласно результатам агглютинации сенсибилизированных эритроцитов, титр антител в сыворотке S х равен 1: 8 - большее из двух разведений сыворотки с агглютинацией на ++ (табл.13).

РНГА относится экспресс - методу, характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, даёт возможность проводить раннюю диагностику болезни, а также отличается простой методикой выполнения и не требует стерильных условий.

Однако следует отметить, что качество и стабильность эритроцитарных диагностикумов напрямую зависит от степени очистки антигенов, а также от индивидуально подобранных для каждого антигена вируса условий фиксации, танизации и сенсибилизации эритроцитов.

Материальное обеспечение: эритроцитарный антигенный диагностикум; исследуемая сыворотка крови; иммунологические планшеты; физиологический раствор; дистиллированная вода; механические дозаторы одноканальные с одноразовыми наконечниками; расходные материалы.

Примерный план занятия (2 часа)

1 Проведение тестирования студентов

2 Объяснение преподавателя по теме занятия.

3 Демонстрация: а) диагностического набора для РНГА; б) методики постановки РНГА.

4 Самостоятельная работа студентов: а) постановка РНГА; б) учёт результатов РНГА; в) определение титра антител в сыворотке крови..

5 Подведение итогов занятия

6 Задание к следующему занятию

Контрольные вопросы

1 В чём принцип реакции непрямой гемагглютинации?

2 В чём отличие непрямой гемагглютинации от прямой?

3 В чём заключается методика РНГА для определения титра антител в сыворотки крови?

4 В чём достоинства и недостатки РНГА?

Тема 16 Реакция торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА)

Цель занятия: изучить реакцию торможения гемагглютинации; овладеть методикой определения титра антител в реакции торможения гемагглютинации.

Реакция торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА, РЗГА)основана на том, что антитела при взаимодействии с гомологичными антигенами гемагглютинирующих вирусов образуют комплекс антиген – антитело, в котором вирус утрачивает не только инфекционную, но и гемагглютинирующую активность. В качестве индикатора свободного не связавшегося вируса в реакции используют эритроциты, которые получены от животного того вида, в отношении которого вирус проявляет агглютинирующую активность. Признаком положительной реакции является отсутствие (торможение или задержка) геммаггютинации.

РТГА используют, во-первых, для идентификации вируса, во-вторых – для обнаружения антител и определения титра антител.

Так как, не известно, какое количество антигена гемагглютинирующего вируса или в каком титре антитела содержатся в исследуемом материале, то перед реакцией данный материал разводят с кратностью 2. Второй стандартный специфический компонент (референс) берут в реакцию или в постоянном рабочем разведении (сыворотка), или в постоянной рабочей дозе (вирус) соответственно. Для референс–вируса таким стандартом является его гемагглютинирующий титр, равный 4 ГАЕ.

Методика определения титра антител в РТГА (табл.14)

РТГА ставят микрометодом в специальных иммунологических 96-луночных планшетах.

1 Готовят последовательные двукратные разведения исследуемой пробы сыворотки крови. Для этого вносят в лунки с № 1 по № 5 по 50,0 мкл физиологического раствора (рН 7,2), далее в лунку № 1 вносят 50,0 мкл исследуемой сыворотки, перемешивают и переносят 50,0 мкл в лунку № 2, перемешивают и 50,0 мкл переносят в лунку № 3 и так далее до пятой лунки. Удаляют из лунки № 5 после перемешивания 50,0 мкл сыворотки в разведении 1:32.

2 Добавляют к каждому разведению сыворотки по 50,0 мкл 4 ГАЕ референс–вируса.

3 Ставят одновременно следующие контроли в лунках №№ 6, 7, 8, 9, 10, 11: в лунке № 6 (контроль исследуемой сыворотки крови на наличие гемагглютининов) – вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл неразведённой сыворотки крови; в лунке № 7 (контроль эритроцитов на самоагглютинацию) – вносят 100,0 мкл физиологического раствора; в лунках № 8,9,10,11 (контроль рабочей дозы вируса – 4 ГАЕ) – вносят 50,0 мкл физиологического раствора, затем в лунку № 8 вносят 50,0 мкл вируса в титре 4 ГАЕ, перемешивают и переносят 50,0 мкл в лунку № 9, перемешивают и 50,0 мкл переносят в лунку № 10, перемешивают и переносят в лунку № 11. Из лунки № 11 после перемешивания удаляют 50,0 мкл вируса.

4 Инкубируют 30-40 мин. при комнатной температуре.

5 Вносят во все лунки по 50,0 мкл 1,0% -ной суспензии эритроцитов.

6 Инкубируют 15 – 20 мин. при комнатной температуре

7 Учитывают результат по гемагглютинации

8 Определяют титр антител в исследуемой сыворотке крови

За титр антител в РТГА принимают наибольшее разведение сыворотки, которое ещё полностью тормозит гемагглютинацию.

Таблица 14

Протокол титрования сыворотки в РТГА

№№ лунок	1		2		3		4			5	6	7		8	9	10	11

Компоненты

Реакции

Разведения сыворотки SХ

КОНТРОЛИ

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

Эр

SХ

АГ (вируса) ГАЕ

2 1 1/2 1/4 1 Физ.р-р (мкл) 50,0

50,0

100

50,0 50,0 50,0 50,0 50,0 2Исследуемая сыворотка SХ 50,0

Перенос по 50,0

50,0 - - - - 3 Вирус Т=4 ГАЕ 50,0

50,0

50,0 50,0

Перенос по 50,0

Контакт 30-40 мин. при комнатной температуре

4 1,0%-ная суспензия эритроцитов 50,0

50,0

50,0 50,0 50,0 50,0 50,0

Серологические реакции

1 В основе серологических реакций лежит взаимодействие:

+:антигена и антитела

-:антигена и вирусных белков

-:антитела и иммуноглобулинов

-:антигенов и клеток

2 Вещества, которые обладают интенсивной аутофлуоресценцией и используются для придания такого свойства не флуоресцирующим веществам, называются:

+: флуорохромы

-: конъюгат

-: фермент

-: фиксатор

3 Конъюгатами называются:

+: антитела, связанные с флуорохромом

+: антитела, связанные с ферментом

-: комплекс антиген - антитело

-: субстраты

4 Укажите полное название метода МФА:

+: метод флуоресцирующих антител

-: метод флуоресцирующих антигенов

-: метод ферментирующих антител

-: метод ферментирующих антигенов

5 Для учёта результатов в реакции иммунной флуоресценции используют:

+: люминесцентный микроскоп

-: световой микроскоп

-: электронный микроскоп

-: инвертируемый микроскоп

6 Принцип прямого варианта РИФ состоит:

+: взаимодействие антигена и специфического конъюгата

-: взаимодействие антигена и антивидового конъюгата

-: взаимодействие антигена и флуорохрома

-: взаимодействие антигена и субстрата

6 Какой конъюгат используют для непрямого варианта РИФ:

+: антивидовой флуоресцирующий

-: антивидовой пероксидазный

-: специфический флуоресцирующий

-: специфический пероксидазный

7 Какое свечение приобретает ДНК в методе флуорохромирования акридиновым оранжевым:

+: жёлто-зелёное

-: рубиново-красное

-: сине-фиолетовое

-: жёлто-коричневое

8 Укажите последовательность этапов прямого варианта РИФ:

1: приготовление мазка

2: фиксация мазка

3: нанесение конъюгата

4: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

5: учёт результата реакции

8 Укажите последовательность этапов непрямого варианта РИФ:

1: приготовление мазка

2: нанесение специфической сыворотки крови

3: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

4: нанесение антивидового конъюгата

5: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

6: учёт результата реакции

9 Как называется сыворотка, полученная против белков сыворотки другого вида животного:

+:антивидовая

-: специфическая антигенная

-: антивирусная

-: антикомплементная

10 Укажите полное название метода ИФА:

+: иммуноферментный анализ

-: метод флуоресцирующих антител

-: иммунофлуоресцентный анализ

-: иммунофракционный анализ

11 Конъюгатом в ИФА является:

+: антитела, связанные с ферментом

-: антитела, связанные с флуорохромом

-: комплекс антиген-антитело

-: специфический антиген

12 Что в методе ИФА лежит в основе появления цветного продукта?

+: взаимодействие фермента и субстрата

-: взаимодействие антител и антигена

-: взаимодействие фермента с антителами

-: взаимодействие субстрата с антигеном

13 Результат, полученный в ИФА можно оценить:

+: по изменению окраски визуально

+: по оптической плотности в спектрофотометре

-: по свечениюв люминесцентном микроскопе

-: по цитопатическому действию в световом микроскопе

14 Укажите последовательность этапов сэндвич варианта ИФА:

1: внесение специфических антител в лунки планшета

2: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

3: внесение антигена вируса в лунки планшета

4: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

5: внесение специфического конъюгата в лунки планшета

6: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

7: внесение субстрата

8: учёт результата

15 Сэндвич вариант ИФА используется для:

+: индикации и идентификации вируса

-: обнаружения антител и титрования антител

16 Укажите последовательность этапов непрямого варианта ИФА:

1: внесение специфического антигена в лунки планшета

2: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

3: внесение сыворотки в лунки планшета

4: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

5: внесение антивидового конъюгата в лунки планшета

6: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов

7: внесение субстрата

8: учёт результата

17 Непрямой вариант ИФА используется для:

+: обнаружения и титрования антител

-: индикации и идентификации вируса

18 Метод, основанный на диффузия молекул антигенов и антител в агаровом называется _________________________________________________

+:реакция диффузионной преципитации

19 Положительным результатом РДП является:

+: наличие линий преципитации

-: наличие флуоресценции

-: наличие цветного продукта реакции

-: гибель тест-объектов

20 РДП используют для:

+: индикации и идентификации вируса

+: обнаружения антител и титрования антител

21 Реакция, в которой при образовании комплекса антиген-антитело вирус утрачивает свою инфекционную активность, называется:

+: реакция нейтрализации

-: реакция иммунной диффузии

-:иммуноферментный анализ

-:реакция диффузионной преципитации

-:реакция непрямой гемагглютинации

22 Индикатором свободного вируса в РН является:

+: живые системы

-: флуорохромы

-: ферменты

-: субстраты

23 Признак положительного ответа в РН - это:

+: отрицательный результат биопробы

-: положительный результат биопробы

-: свечение

-: окрашивание

24 Идентификацию вируса в РН проводят на основе определения:

+: индекса нейтрализации

-: гемагглютинирующей активности

-: торможения гемадсорбции

-: цитопатического действия

25 За титр антител в сыворотке крови в РН принимают:

+: разведение сыворотки, защищающее 50% - тест - объектов от 100ЭД₅₀ вируса

-: разведение сыворотки, защищающее 50%- тест - объектов от 4ГАЕ вируса

-: разведение сыворотки, защищающее 50%- тест - объектов от гемадсорбирующей активности вируса

26 Что считается главным преимуществом реакции нейтрализации:

+: высокая специфичность

-: необходимость стерильных условий

-: быстрота постановки

-: простота реакции

27 Укажите полное название метода РНГА:

+: реакция непрямой гемагглютинации

-: реакция не полной гемагглютинации

-: реакция не пропорциональной гемагглютинации

28 Что является положительным результатом РНГА:

+: гемагглютинация

-: гемадсорбция

-: гемолиз

-: гемостаз

29 Что является обязательным компонентов в РНГА:

+: эритроциты с адсорбированными антителами

+: эритроциты с адсорбированными антигенами

-: эритроциты

-: эритроциты + стабилизатор

30 Укажите основные этапы в получение эритроцитарного диагностикума:

1: выделение эритроцитов

2: стабилизация ( консервация) эритроцитов

3: танизация эритроцитов

4: сенсибилизация эритроцитов специфическими антигенами или специфическими антителами

31 Укажите полное название метода РТГА:

+: реакция торможения гемагглютинации

-: реакция трудоёмкой гемагглютинации

-: реакция территориальной гемагглютинации

32 Как называется эффект действия, который вирус утрачивает вирус в РТГА? ________________________________________

+: гемагглютинирующий

33 Что является индикатором вируса, не связанного с антителами, в РТГА:

+: эритроциты

-: живая система

-: ферментозависимое вещество

-: агаровый гель

34 Выберите признак положительной РТГА:

+:пуговка

-:зонтик

-: линия преципитации

-:свечение

35 Как подготовить исследуемую сыворотку для ее титрования в РТГА:

+:освободить от неспецифических ингибиторов

-:исследовать в РГА

-: заморозить и отморозить

-:профильтровать

35 Чему равно стандартное значение гемагглютинирующего титра вируса, в котором его используют в РТГА:

+:4 ГАЕ

-: 3 ГАЕ

-: 2 ГАЕ

-: 1 ГАЕ

36 Что принимают в РНГА за титр антител в сыворотке:

+: наибольшее разведение сыворотки, дающее гемагглютинацию не менее, чем на два креста

-: наибольшее разведение сыворотки, тормозящее гемагглютинацию

-: наименьшее разведение сыворотки, тормозящее гемагглютинацию

-: наименьшее разведение сыворотки, дающее гемагглютинацию не менее, чем на два креста

Список литературы

1 Белоусова Р.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. – 3-е изд, перераб. и доп. – М.: КолосС, 2006. – 248 с.

2 Белоусова Р.В., Преображенская Э.А., Третьякова И.В. Ветеринарная вирусология / Под ред. проф.Р.В. Белоусовой. – КолосС, 2007. – 424 с.

3 Белоусова Р.В., Третьякова И.В., Калмыкова М.С., Ярыгина Е.И. Ветеринарная вирусология. Методические рекомендации – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. – 62 с.

4 Белоусова Р.В., Третьякова И.В., Калмыкова М.С., Ярыгина Е.И. Пособие по ветеринарной вирусологии. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2013. – 62 с.

5 Белоусова Р.В.. Ярыгина Е.И., Третьякова И.В., Калмыкова М.С.., Рогожин В.Н. Вирусология и биотехнология: Учебник. – СПб.: Издательство «Лань», 2016. – 220 с.

6 Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / Под ред. проф. Дьяконова Л.П., проф. Ситькова В.И. – М.: Издательство Спутник+, 2009. – 656 с.

7 Калмыкова М.С., Калмыков М.В., Белоусова Р.В. Основы полимеразной цепной реакции с разными форматами: Учебное пособие. – СПб.: Издательство «Лань», 2009. - 80 с.

8 Медицинская вирусология. часть вторая. / Под ред. А.М. Королюка и В.Б. Сбойчакова. – СПб, 2002. – 163 с.

9 Основы вирусологии: Учебное п

12 3 4 5 6 7 8 9 10 Следующая ⇒