Методы выделения флавоноидов из лрс

1. Экстракция суммы флавоноидов из ЛРС (70%,80% этанолом или метанолом).

2. Отгонка спирта под вакуумом до водного остатка.

3. Очистка полученной суммы флавоноидов СCl4от липофильных веществ.

4. Разделение флавоноидов на фракции растворителями с возрастающей полярностью:

1) экстракция агликонов этиловым эфиром;

2) экстракция моногликозидов этилацетатом;

3) экстракция биозидов, триозидов и др. полярных флавоноидов н-бутанолом.

5. Разделяют полученные фракции с помощью колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте, силикагеле или целлюлозе. Элюирование веществ проводят смесью хлороформа с этанолом или спирто-водными смесями с возрастающей концентрацией спирта.

Контроль за ходом разделения флавоноидов проводят методом хроматографии: используют ТСХ, БХ или высокоэффективную газожидкостную хроматографию. Наиболее подходящими системами для БХ флавоноидов являются:

15%, 60% РАСТВОРЫ УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ;

БУТАНОЛ - УКСУСНАЯ КИСЛОТА - ВОДА (4:1:5).

Для ТСХ: ХЛОРОФОРМ-МЕТАНОЛ (8:2).

6. Установление структуры выделенных соединений проводят с помощью физико-химических методов:

· определение температуры плавления;

· определение удельного вращения (гликозидов);

· сравнение УФ-, ИК-, масс-, ПМР-спектров со спектрами

известных образцов.

5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с треххлористой сурьмой, образуют комплексные соединения, окрашенные в желтый или красный цвет;

· многие флавоноиды дают окрашенные комплексы желтого цвета с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида, с 2% спиртовым раствором циркония хлорида. Флавоноиды, имеющие две оксигруппы у С3 и С5, дают хелаты жёлтого цвета за

счёт образования водородных связей между карбонильной и гидроксильными группами:

4. Флавоноиды со свободной 7-оксигруппой вступают в реакцию с солями диазония, образуя оранжевые или красные продукты азосочетания.

II. Реакции осаждения

Все флавоноиды с основным ацетатом свинца образуют осадки, окрашенные в ярко-желтый или красный цвет.

Средним ацетатом свинца осаждаются лишь флавоноиды, содержащие свободные орто-гидроксильные группы в 3', 4' -положениях кольца В.

III. Хроматография

Для обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется бумажная и тонкослойная хроматография. Обнаружение флавоноидов на хроматограммах проводят:

· по окраске пятен в видимом свете (антоцианы);

· по характеру свечения в УФ-свете: флавоны, флавонол-3-О-гликозиды, флаваноны и халконы обнаруживаются в виде темно-коричневых пятен, флавонолы и их 7-О-гликозиды - в виде желтых или желто-зеленых;

· по характеру свечения в УФ-свете после проявления 5%-ным спиртовым раствором хлорида алюминия и последующего прогревания хроматограммы при 105°С в течение 2-3 мин: наблюдают пятна флавоноидов с интенсивной желтой и желто-зеленой флуоресценцией.

Количественное определение

Для количественного определения флавоноидов в растительном сырье наибольшее распространение получили физико- химические методы, прежде всего фотоколориметрия и спектрофотометрия.

1. Фотоколориметрический метод основан:

· на цветных реакциях комплексообразования с солями различных металлов (алюминия, циркония, хрома, сурьмы);

· на реакции с лимонно-борным реактивом;

· на реакции восстановления атомарным водородом в кислой среде в присутствии металлического магния или цинка.

2. Спектрофотометрический метод, основанный на способности флавоноидов поглощать свет в УФ-области спектра.

3. Хромато-спектрофотометрический метод - более совершенный метод количественного определения флавоноидов, используется в сочетании с хроматографией, что позволяет произвести очистку и разделение суммы веществ на отдельные компоненты.

Реже используют:

4. Флюориметрический метод.

5. Полярографический метод.

6. Наличие фенольных гидроксилов, обуславливающих слабокислые свойства флавоноидов, позволяет использовать метод кислотно-основного титрования в неводных растворителях: диметилформамиде, диметилсульфоксиде, ацетоне.

Познавательные статьи:



Где возникла философия и почему?

Относительная высота сжатой зоны бетона

Сущность проекции Гаусса-Крюгера и использование ее в геодезии

Тарифы на перевозку пассажиров