Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ:  Археология Биология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия ЭкологияТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву 
Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Приготовление проявляющего реагентаСодержание книги
Поиск на нашем сайте В качестве проявляющего реагента используют коммерческий препарат конъюгата кроличьих АТ к суммарной фракции иммуноглобулинов IgG1 человека, меченых пероксидазой хрена, который разводится буфером Na-ФСБ в соотношении 1: 1000. Объем на одну пробу – 200 мкл разведенного конъюгата антиIgG-ПХ. Приготовление хромогенной смеси Субстратная смесь для конечной стадии анализа готовится непосредcтвенно перед употреблением по следующей методике: 8 мг ортофенилендиамина (ОФД) растворяют в 20 мл 0,1 М натрий-цитратного буфера, рН 5,0; к полученному раствору добавляют 8 мкл 30% раствора H2O2 Б. Выполнение анализа Стадия: взаимодействие АТ с иммобилизванным на полистироле анти- IgG1 АТ · Калибровочная кривая В лунки полистирольного планшета с иммобилизованными анти- IgG1 антителами вносят по 200 мкл раствора каждого стандарта (от 0 до 500 нг) в повторах
· Анализируемые пробы В лунки полистирольного планшета с иммобилизованными анти- IgG1 антителами вносят по 200 мкл анализируемой сыворотки крови, разведенной в 32 и 64 раза в повторах. Планшет инкубируют при комнатной температуре при слабом перемешивании на лабораторном шейкере в течение 60 минут, затем раствор удаляют и планшет трижды промывают дистиллированной водой для удаления несвязанных АТ. 2 стадия: проявление образовавшихся на твердой фазе иммунных комплексов с помощью конъюгата анти- IgG1 –ПХ - в лунки планшета с калибровочными и анализируемыми пробами вносят по 200 мкл раствора анти- IgG1 –ПХ;
- в лунки планшета с калибровочными и анализируемыми пробами вносят по 150 мкл свежеприготовленного раствора хромогенной смеси; - планшет инкубируют при комнатной температуре при слабом перемешивании на лабораторном шейкере в течение 15 минут для развития окраски (от бледно-лимонного до насыщенно-оранжевого цвета); - реакцию останавливают внесением в каждую лунку по 50 мкл 10% раствора H2SO4 ; - оптическую плотность в пробах измеряют с использованием ИФА-риддера с длиной волны 492 нм. В. Построение калибровочной кривой и определение концентрации иммуноглобулина IgG1 в анализируемых пробах Для построения калибровочной кривой используют среднее от результатов измерения в двух аналогичных пробах. Калибровочная кривая строится как зависимость полученных значений оптической плотности (B OD492) от концентрации антител в пробе (от 0 до 500 нг) в соответствии с рисунком 4.13. Определение концентрации АТ в анализируемых пробах проводится с использованием калибровочного графика. Полученные значения концентрации АТ в пробе используются для расчета содержания IgG1 в миллилитре сыворотке крови по следующей формуле:
C = 5. n . c, (3.1) где n – разведение образца сыворотки, c – концентрация АТ в анализируемой пробе разведенной. Содержание отчета Зарисуйте необходимые схемы и графики. Приведите расчетные данные по определенным количественным параметрам результатов ИФА. Проанализируйте диагностическое значение полученных результатов. Контрольные вопросы 1 Структура молекулы АТ. Функции отдельных участков молекулы Ig 2. Нормативные показатели концентрации Ig разных классов сыворотки крови человека 3. Физиологическое и патофизиологическое значение Ig разных классов 4. Методы определения концентрации основных изотипов иммуноглобулинов (реакция простой радиальной иммунодиффузии по Манчини). 5. Реакции серологического метода и их значение в детекции антител. Литература 1. Пиккеринг У.Ф., Современная аналитическая химия, пер. с англ., М., 1977 2. Дифференциальная лабораторная иммунодиагностика вирусных гепатитов, методические указания. Новик А.А., Цыган В.Н., Никитин В.Ю., Соколова Е.Д., Жданов К.В., 3. Огарков П.И., Лобзин Ю.В.,Жоголев К.Д., Малышев В.В.,ТокмаковВ.С., Сухина И.А. Издательство: Министерство обороны РФ, Главное Военно-Медицинское управление, Москва, 2002.Страницы: 74. 4. Иммунологические методы/Под ред. Г. Фримеля, Пер. с нем. А.П. Тарасова. – М.: Медицина, 1987, 472 с. 5. Лабораторный практикум по иммунологии для студентов 3 курса факультета экологической медицины: практикум.// Романовская Т.Р., Пивень Н.В., Мельникова Я.И. и др. – МГЭУ им. А.Д. Сахарова, 2006 – 44 с. 6. Crowther, J. R. 1995. ELISA. Theory and Practice. Methods Mol. Biol. 42:1-223. Engvall, E., and P. Perlmann. 1971. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. I mmunochem.8:871-874. 7. Scheffold A, Kern F. Recent developments in flow cytometry. J Clin Immunol. 2000;20:400 8.Kirschfinr M. /DMW: Dtsch. Med. Wochenschr. – 1994 – 119 - №9 – p. 307-310 Лабораторная работа № 4
|
||
|
|
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-10; просмотров: 279; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 216.73.216.156 (0.006 с.) |
- планшет инкубируют при комнатной температуре и слабом перемешивании на лабораторном шейкере в течение 45 мин, затем раствор удаляют и планшет трижды промывают дистиллированной водой для удаления несвязанного конъюгата анти- IgG1 ПХ;
