Работа 3. Термолабильность ферментов.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 12 из 76Следующая ⇒

Ферменты при нагревании до 60-80^о утрачивают свои свойства биологических катализаторов. Степень инактивирования зависит от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного катализа снижается. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия ферментов слюны: амилазы и мальтозы.

Порядок выполнения работы

В чистую пробирку отливают небольшое количество разведенной слюны (2-3мл) и кипятят ее в течение 5-8 минут, после чего охлаждают. В 3 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 1% раствора крахмала. В 1-ю пробирку добавляют 10 капель слюны, разведенной в 5 раз, во 2-ю – 10 капель прокипяченной слюны, в 3-ю – 10 капель воды (в качестве контроля). Все пробирки помещают в термостат или водяную баню при температуре 38^о на 10 минут. После этого проделывают качественные реакции на крахмал и реакцию Фелинга на продукты расщепления.

Реакция на крахмал. К 5 каплям исследуемого раствора приливают 1 каплю раствора йода в йодистом калие. В присутствии крахмала появляется синее окрашивание. Полученные результаты занесите в таблицу:

Сделайте вывод о термолабильности ферментов.

Работа 4. Влияние рН среды на активность

Амилазы слюны.

Для проявления максимальной каталитической активности ферментов требуются определенные условия, в том числе оптимальная концентрация водородных ионов. Каждый фермент наиболее активен в пределах довольно узкой зоны рН, называемой оптимум рН (см. таблицу). Активность ферментов уменьшается, если рН меняется в любую сторону от оптимального значения. Отклонение рН от оптимума влияет на степень ионизации групп в активном центре фермента и субстрата, может нарушить связь между белковой частью фермента и их простетическими группами, может влиять на связывание субстрата с ферментами.

Оптимальное значение рН для некоторых ферментов

Порядок выполнения работ

В 7 предварительно пронумерованных пробирок наливают 0,2 М раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 М раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице:

Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по10 капель 1% раствора крахмала, по 10 капель слюны, разведенной в 50 раз. Перемешивают содержимое пробирок и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38^о на 5-10 минут (в зависимости от индивидуальных особенностей активности слюны). Затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода в йодистом калие, перемешивают, наблюдают окраску и определяют рН, при котором амилаза действует наиболее активно. В зависимости от активности слюны ее можно разводить не в 50, а в 10 раз.

Сделайте вывод о влиянии рН среды на активность ферментов.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

1.1. – в

1.2. – б

2.1. – 1-в, 2-а, 3-д, 4-б, 5-е, 6-г

2.2. – 1-г, 2-б,в,д; 3-г; 4-г; 5-б; 6-е; 7-б

3.1. – 4

3.2. – 2,4

4.1. – Д (- + -)

4.2. – Д (- + -)

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1.

Согласно теории индуцированного соответствия (теории Кошленда), связываясь с активным центром, субстрат вызывает изменение пространственной формы молекулы фермента и переводит его в более устойчивую, стабильную конформацию при действии температуры.

Задача 2.

Наличие сильного положительного заряда, большое число свободных орбиталей (следовательно, способность связывать большое число лигандов), возможность выступать в роли как акцептора, так и донора электронов – все эти свойства переходных металлов обусловливают их участие в биокатализе в качестве кофакторов.

Познавательные статьи:



Техника нижней прямой подачи мяча

Комплекс физических упражнений для развития мышц плечевого пояса

Стандарт Порядок надевания противочумного костюма

Общеразвивающие упражнения без предметов