Тема 4. Введение в обмен веществ.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 13Следующая ⇒

ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН

Лабораторная работа № 5

Определение продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови

Принцип метода: Продукты перекисного окисления липидов (малоновый альдегид) образуют с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) окрашенный комплекс, экстрагируемый бутанолом.

Разность интенсивности окраски раствора при двух длинах волн прямо пропорциональна концентрации продуктов перекисного окисления липидов в нем.

Норма: 2,12-4,8 мкмоль/л.

Оборудование и реагенты:

1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 535 нм и 570 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 20-37°С;

2) Секундомер;

3) Водяная баня на 100°С;

4) Центрифуга на 3000 об/мин (1800 g);

5) Автоматические пипетки с переменным объемом на 100-500 мкл и 1-3 мл;

6) Сыворотка крови;

7) Реагент (тиобарбитуровая кислота, 5 г/л);

8) Ортофосфорная кислота (раствор 1,4 %);

9) п -Бутанол;

10) Дистиллированная вода.

Проведение анализа

Перемешать содержимое в пробирках, интенсивно встряхивая их до образования однородной белой суспензии розового оттенка. Затем пробирки центрифугировать 10 мин при 3000 об/мин. Сразу после центрифугирования отобрать по 1 мл супернатанта в чистые пробирки. Измерить оптическую плотность опытной пробы против холостой пробы при двух длинах волн 535 нм и 570 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Окраска раствора стабильна в течение 1,5 часа после центрифугирования.

Расчет

Расчет содержания продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке проводят по формуле:

где А₅₃₅ и А₅₇₀ – опт.плотность пробы при длине волны 535 нм и 570 нм,

соответственно;

0,156 – коэффициент молярной экстинции комплекса малонового

альдегида с тиобабитуровой кислотой;

15 – коэффициент разведения сыворотки.

Клинико-диагностическое значение: Образующиеся в процессе развития ПОЛ ненасыщенные альдегиды и малоновый альдегид являются мутагенами и обладают выраженной цитотоксичностью: подавляют активность гликолиза и окислительного фосфорилирования, ингибируют синтез белка и нуклеиновых кислот, окисляют белковые SH-группы, ингибируют различные цитозольные и мембраносвязанные ферменты.

ТЕМА 5. ХИМИЯ И ОБМЕН УГЛЕВОДОВ

Лабораторная работа № 6.

Определение концентрации глюкозы в крови ферментативным методом (с помощью прибора контроля уровня глюкозы в крови ONE TOUCH BASIC PLUS)

Принцип метода: Система контроля уровня глюкозы в крови ONE TOUCH BASIC PLUS предназначена для определения уровня глюкозы в цельной крови в домашних и клинических условиях. Система включает в себя прибор ONE TOUCH BASIC PLUS, тест-полоски, ланцеты и флакон с контрольным раствором.

Тест основан на глюкозооксидазной реакции, специфичной для глюкозы. На любые другие сахара тест не реагирует. После нанесения крови на тест-полоску компоненты последней реагируют с кровью в следующей последовательности:

Пероксид водорода реагирует с хромогеном (4-аминоантипирин) с образованием красителя хинонимина:

Интенсивность окраски пятна при длине волны 505 нм прямо пропорциональна концентрации глюкозы в нем.

Линейность метода: до 33,3 ммоль/л.

Норма:

Цельная кровь – 3,3-5,5 ммоль/л (18-25°С);

Сыворотка – 3,8-6,1 ммоль/л.

Оборудование и реагенты:

1) прибор ONE TOUCH BASIC PLUS;

2) тест-полоски;

3) ланцеты;

4) Стандарт (контрольный раствор 4,8-6,8 ммоль/л).

Проведение анализа

1. Включить прибор. На экране автоматически появится результат предыдущего теста.

2. Установить код нажатием кнопки «С». Номер кода на приборе должен совпадать с номером кода на флаконе с тест-полосками.

3. Ввести тест-полоску в прибор до упора.

4. Проколоть палец с помощью нового стерильного ланцета.

5. Аккуратно нанести каплю крови на зону теста.

6. Получить точный результат через 45 секунд (дата, время, уровень глюкозы в ммоль/л).

Хотя система ONE TOUCH BASIC PLUS требует малого количества крови, очень важно, чтобы капля крови была достаточно большой и закрывала полностью зону теста.

Данный прибор не предназначен для диагностики сахарного диабета и для измерения уровня глюкозы в крови у новорожденных детей в возрасте до 4 недель.

Если результаты анализа ниже 3,3 ммоль/л, на экране появится надпись «опасно врач» – следует немедленно принять меры вместе с лечащим врачем при гипогликемии.

Если результат выше 33,3 ммоль/л, на экране прибора появится надпись «НI опасно врач», что указывает на недопустимо высокую концентрацию глюкозы в крови (острая гипергликемия) и требуется немедлнное обращение к врачу.

Для проверки правильности показаний прибора (минимум 1 раз в неделю) можно использовать проверочную тест-полоску или контрольный раствор:

Клинико-диагностическое значение: Увеличенные уровни глюкозы в крови (гипергликемия) характерны для сахарного диабета, гиперфункции щитовидной железы, гипофиза и надпочечников.

Концентрация глюкозы в крови ниже нормы (гипогликемия) наблюдается при инсулин-секретирующих опухолях, микседеме, гипофункции гипофиза, гипофункции надпочечников, и в случае введения пациенту сверхбольшой дозы инсулина.

Лабораторная работа № 7.

Познавательные статьи:



Как правильно слушать собеседника

Типичные ошибки при выполнении бросков в баскетболе

Принятие христианства на Руси и его значение

Средства массовой информации США