Выявление ускоряющего и замедляющего влияния на ферменты.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 6Следующая ⇒

Хлорид натрия - активатор амилазы слюны, ингибиторы амилазы ионы серебра, соли меди, свинца.

Ход работы. В три пробирки внести по 3 мл слюны, разведенной 1:3 водой. В первую пробирку добавить 2 капли 1%-ного раствора хлорида натрия, во вторую - 1 каплю 1%-ного раствора сернокислой меди, в третью - каплю воды (контроль). Затем во все пробирки внести по 5 капель 1%-го раствора крахмала и оставить при 37⁰С на 3 мин, после чего внести во все пробирки по одной капле раствора Люголя и сравнить интенсивность появляющегося синего окрашивания, характерного для крахмала. Выявить (по интенсивности окраски), в какой из пробирок произошел наиболее полный распад крахмала. Напомним, что интенсивность окраски пропорциональна концентрации крахмала.

2. Количественное определение активности амилазы мочи (диастазы). Нормальная активность диастазы в моче здоровых людей невелика - от 4 до 64 ед. (за единицу принимают то её количество, которое за 30 мин при 38⁰С полностью расщепляет 1 мл 0,1%-ного раствора крахмала).

При некротических процессах или воспалительных заболеваниях поджелудочной железы, при воспалении околоушной железы увеличивается активность диастазы в крови, и, как следствие, в моче. Это наблюдение является вспомогательным диагностическим признаком.

Ход работы. В десять пронумерованных пробирок внести по 1 мл 0,14 н раствора хлорида натрия. В одну из пробирок внести 1 мл исследуемой мочи, смешать и затем перенести 1 мл смеси во вторую пробирку, смешать, перенести в третью и т. д. Из последней (десятой) пробирки 1 мл смеси вылить. Во все пробирки внести по 2 мл 0,1%-ного раствора крахмала и по 1 мл 0,14 н раствора хлорида натрия, смешать, поместить на водяную баню (45⁰С) на 15 мин.

Одновременно и быстро охладить все пробирки, поместив их в холодную воду и добавить в каждую по одной капле раствора Люголя. Жидкость окрашивается в желтоватый цвет йодом, в различные оттенки розового (декстрины) и фиолетового (декстрины с большим размером молекул), а также в синий цвет (крахмал).

Учет результата. Рассчитать количество мочи в последней (слева направо) пробирке, сохранившей желтоватую окраску (полное расщепление крахмала).

Допустим, это пробирка № 4, моча в которой разведена в 16 раз по сравнению с пробиркой 1, где было 0,5 мл мочи. Следовательно, в пробирке 4-й мочи содержится 0,03125 мл (0,5/16). Это количество мочи вызвало расщепление 2 мл 0,1%-го раствора крахмала, а 1 мл мочи способен расщепить х мл, т.е. 0,03125 мл мочи расщепило 2 мл 0,1%-ного раствора крахмала, а 1,0 мочи может расщепить х мл крахмала.

Составляем уравнение и рассчитаем значение величины Х:

Х = = 64 мл 0,1 %-ного раствора крахмала,

следовательно, в моче содержится 64 ед. амилазы на 1 мл мочи

3адание: каждый студент получает результаты анализа двух проб мочи и определяет содержание диастазы в одном мл мочи, выражая в единицах. Результат сопоставить с нормальными значениями.

Выполнить следующее:

1. При определении активности фермента получены данные, представленные в таблице:

Построить график зависимости активности энзима от рН, высказать предположение о том, какой фермент находится в растворе, определить принадлежность фермента к классу и группе соответственно высказанному предположению.

2. Оптимум рН исследуемого фермента 6,9 - 7,0, субстрат фермента - высокомолекулярный природный полимер, обнаруживаемый по характерному окрашиванию в присутствии йода; продукты взаимодействия фермента с субстратом окрашиваются при нагревании в присутствии сернокислой меди в красно-кирпичный цвет.

Назовите фермент, субстрат, реагент, используемый для обнаружения субстрата, продукты гидролиза субстрата и определите принадлежность фермента к классу, группе.

3. Субстрат исследуемого фермента образует белый осадок при нагревании, дает положительную биуретовую реакцию. После длительной инкубации с ферментом при разных значениях рН интенсивность биуретовой реакции снизилась, увеличилось число свободных аминогрупп, усилилась положительная реакция с нингидрином. Особенно заметными эти изменения были при рН 8,0 - 9,0.

Назовите субстрат, фермент, определите принадлежность фермента к классу и группе. Почему увеличилось число свободных аминогрупп и нингидриновая реакция: стала интенсивнее?

4. За единицу активности амилазы слюны принимают то ее количество, которое расщепляет за 30 мин при 38⁰С 1 мл 0,1%-ного раствора крахмала. При инкубации разведенной слюны обнаружилось, что в восьмой пробирке реактив Люголя окрашивает жидкость в желтый цвет, а в девятой появился розовый оттенок. Разведение слюны готовили в геометрической прогрессии со знаменателем, равным двум (в пробирке 1 был 1 мл слюны). Количество раствора крахмала везде было одинаковым - 1 мл. Сколько единиц активности амилазы содержит 1 мл исследуемой слюны?

5. Исследуемый фермент расщепляет внутримолекулярные связи (исключая связи С-С) согласно реакции А + Б ^+Н₂^О > АН+БОН.

К какому классу относится фермент?

6. Фермент расщепляет С - С связи негидролитическим путем. Назовите класс, к которому относится фермент.

8. К какому классу относится фермент, катализирующий превращение молекулы глюкозы в молекулу фруктозы?

9. Назовите класс, к которому относится фермент, катализирующий реакции типа СН₃ - СО - СООН + CО₂ → HООC - СН₂ – СО - СООН.

ЗАНЯТИЕ 7 (Введение в обмен веществ и энергии.

Биологическое окисление).

Цель: 1. Познакомиться с определением понятия «Обмен веществ», убедиться в том, что обмен веществ – совокупность всех химических превращений в организме; познакомиться с терминологией, используемой при изучении настоящего раздела, уяснить суть понятий «анаболизм» и «катаболизм» и их отличия от терминов синтез и распад. 2. Познакомиться с историей развития представлений о биологическом окислении и современным понятием «биологическое окисление», с представлением о формах биологического окисления, роли свободных радикалов кислорода, значении свободнорадикального окисления.

Студент должен знать:

1. Что включает понятие «Обмен веществ».

2. Как сочетаются в обменных процессах (анаболических и катаболических) реакции синтеза и распада.

3. Что значит «метаболический путь», виды метаболических путей.

4. Чем отличается биологическое окисление от окисления в неживой природе.

5. В чем заключается биологический смысл окисления в организмах.

6. Структуру макроэргических соединений.

7. Что представляет собой свободнорадикальное окисление.

. Студент должен уметь:

1. Отличать понятия катаболизм и анаболизм от понятий синтез и деструкция (расщепление).

2. Охарактеризовать основные этапы метаболизма

3. Составить схему круговорота энергии и веществ в живой природе с учетом аутотрофных и гетеротрофных организмов.

4. Изобразить структурные формулы важнейших макроэргических соединений живой природы.

5. Составить схему экспериментального выявления окислительно-вос­ста­но­вительных свойств у исследуемого вещества (на примере тирозина)

Студент должен получить представление:

1) об общих чертах метаболических процессов,

2) о важнейших источниках энергии в животном организме,

3) о значении свободнорадикального окисления как физиологического про­цесса,

4) о патологических состояниях, связанных с гипероксидацией,

5) о значении антиоксидантов в комплексе терапевтических мероприятий.

Сведения из базовых дисциплин, необходимые для изучения т емы:

1) основные положения термодинамики,

2) понятия о фазовых реакциях,

3) сведения о катализе,

5) сведения о процессах фотосинтеза в клетке,

6) современная номенклатура химических соединений.

Аудиторная работа.

Познавательные статьи:



Как правильно слушать собеседника

Типичные ошибки при выполнении бросков в баскетболе

Принятие христианства на Руси и его значение

Средства массовой информации США