Производные 1,4-бензодиазепина

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 12 из 17Следующая ⇒

▷ Похожие статьи

Общие свойства веществ.

Распределение производных 1,4-бенздиазепина по органам происходит в три стадии:

· 1-ая характеризуется падением концентрации в крови и накоплением в паренхиматозных органах;

· на 2-ой стадии идет накопление соединений во всех органах. Предел накопления соединений в тканях определяется кажущимся объемом распределения (Vр);

· 3-я стадия, самая продолжительная по времени – характеризуется накоплением соединений в органах выделения (печени, почках), с одновременным уменьшением в остальных тканях органов.

Наибольшее содержание 1,4-бенздиазепинов в ЖКТ, тканях печени, почек.

Ультрафиолетовые спектры

В электронных спектрах производных 1,4-бенздиазепина имеется 3 полосы поглощения с λ_max в областях:

1. 200-215 нм

2. 220-240 нм

3. 290-330 нм

Две первые полосы соответствуют возбуждению ароматических хромофоров. Третью длинноволновую полосу относят к азометиновой связи, сопряженной с бензогруппой.

По характеру поглощения в УФ-области 1,4-бенздиазепины относятся к соединениям, абсорбция которых изменяется от величины значений рН:

- в кислой среде – за счет протонирования атома азота 1 (у хлордиазепоксида) и 4 (1,2-дигидропроизводных 1,4-бенздиазепина – нитразепам, оксазепам, диазепам);

- в щелочной среде в молекуле 1,2-дигидропроизводных 1,4-бенздиазепина наблюдается изменение хромофорной системы (увеличение сопряжения за счет лактим-лактамной таутомерии азометиновой связи в положения 1,2 - нитразепам, оксазепам).

Кислотный гидролиз хлордиазепоксида (I), протекающий в мягких условиях, приводит к образованию 4-окси-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-онов (II). В более жестких условиях эти соединения гидролизуются до 2-аминобензофенонов (III), альфа-аминокислот (IV) и аминов (V).

Метаболизм

Окисление

1.1. N-деметилирование

1. В молекуле диазепама у атома азота в 1 положении

2. В метиламинной группе хлордиазепоксида

Пробоподготовка.

Изолирование из тканей и органов трупа.

Анализ производных 1.4-бензодиазепина по нативным соединениям.

Возможно использование любых общих методов пробоподготовки.

· М-д изолирования нейтральным ацетоном

Биоматериал + н-ацетон à ацетоновое извлечение + 0,5н HCL + н-гексан à очищенная ацетоно-водная вытяжка àацетоно-водная фаза + NaOH + эфир à эфирное извлечение à ТСХ, элюирование à исследование не бензодиазепины.

· М-д Васильевой

Биоматериал + вода, подкисленная органической кислотой à водная вытяжка à водная фаза + NH4OH + хлороформ à органическая фаза à выпаривание à исследование на бензодиазепины

· М-д Стаса-Отто

Биоматериал + 96% этанол + органическая кислота à спиртовой экстракт à упаривание + 100% спирт à отделение осадка à очищенный экстракт à упаривание à остаток + горячая вода à фильтрование à водная фаза + NaOH + хлороформ à органическая фаза à исследование на бензодиазепины

ТСХ-скрининг

1. Общая система

НФ: силуфол

ПФ: хлороформ:этилацетат

Д:

· Р-в Драгендорфа

· Р-р FeCl3 + HCl + HNO3

2. Частная система

НФ: силуфол

ПФ: хлороформ:этилацетат:метанол

Д:

· Р-в Драгендорфа

· Р-р FeCl3 + HCl + HNO3

Обнаружение:

а) реактив Драгендорфа в разбавленной уксусной кислоте образует оранжевые и желто-оранжевые комплексные соли;

б) реактив FPN (хлорид железа (III) в смеси хлорной и азотной кислот) окисляет бензодиазепины с образованием окрашенных продуктов желтого цвета;

в) реактив Марки образует окрашенные продукты желтого цвета;

г) подкисленный йодплатинат образует темноокрашенные пятна.

Количественное определение

Для ГЖХ обнаружения производных 1,4-бензодиазепина и их метаболитов используется общая система: стеклянная колонка 2 м х 4мм с 2,5% SE-30 на хромосорбе Q.

Газ-носитель – аргон/метан

Температура колонки от 150 до 300 С

Температура инжектора – 230

Температура детектора - 300

Подготовка пробы: кровь/моча + вода + р-р NaHCO3 à центрифугирование à центрифугат à ТФЭ + вода à промывают картридж хлороформом à остаток растворяют в метаноле.

ГХ/МС анализ

Газовый хроматограф/ масс-спектрометр

Стандарты: смесь бензодиазепинов

Экстракция: пробирка + биожидкость + стандарт à встряхивают + NaCl + NH4Cl + н-бутилхлорид à экстракция à центрифугирование à органический слой + ацетонитрил + гексан à выпаривание à + этиловый эфир + KOH à центрифугирование à анализ

ВЭЖХ -анализ

Условия хроматографирования:

• хроматограф жидкостный

• ПФ: ацетонитрил:ацетатный буфер

• скорость потока элюирования - 100 мкл/мин

• детектирование - при длине волны 240 нм.

Подготовка пробы: моча + ацетат Na + b-глюкуронидаза à настаивание 2 часа + ацетатный буфер.

Приготовление стандартных образцов.

Для приготовления эталонных растворов используется чистые субстанции. Эти растворы служат для идентификации указанных веществ, определения их хроматографических параметров, а также для приготовления контрольных растворов при проведении количественных анализов.

Качественный анализ.

Идентификация проводится следующим образом:

• сопоставляют время удерживания и коэффициент емкости определяемого компонента и образца сравнения;

• сравнивают УФ-спектры предполагаемого компонента и образца сравнения;

• оценивают совпадение значений времени удерживания определяемого
компонента и образца сравнения при добавлении контрольного раствора в
раствор экстракта из биопробы (причем концентрация образца сравнения
должна быть близка к концентрации определяемого компонента);

• сопоставляют УФ-спектры определяемого компонента и образца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спектральное отношение.

Цветные реакции.

1. Реакция с нингидрином, хлордиазепоксид дает коричневую окраску.

2. Реакция с реактивом Марки, хлордиазепоксид дает желтую окраску.

3. Реакция с реактивом Фреде, хлордиазепоксид дает оранжевую окраску.

4. Реакция Витали — Морена, хлордиазепоксид дает желтую окраску.

ТСХ-обнаружение

Обнаружение хлордиазепоксида методом хроматографии в тонком слое сорбента.

НФ: силикагель КСК или пластинки «силуфол»

ПФ: этилацетат: 25 %-го р-р аммиака: метиловый спирт

хлороформ: ацетон

Д: р-в Драгендорфа

Использование спектров.

5. Обнаружение хлордиазепоксида по УФ- и ИК-спектрам. Хлордиазепоксид в 0,1 н. растворе гидроксида натрия имеет максимумы поглощения при 243 и 260 нм; в 0,1 н. растворе серной кислоты хлордиазепоксид имеет максимумы поглощения при 245 и 306 нм.

6. Хлордиазепоксид в 0,1 н. растворе соляной кислоты имеет максимумы поглощения при 246 и 308 нм.

Диазепам (седуксен)

Диазепам (седуксен, эридан,реланиум и др.) представляет собой белый или белый с желтоватым оттенком кристаллический порошок, не растворяется в воде, трудно растворяется в этиловом спирте, растворяется в хлороформе.

Т1/2 = 20-55 часов.

По действию на организм диазепам относится к транквилизаторам. Он способствует нормализации сна, применяется для лечения невротических состояний, уменьшает чувство страха и т. д.

Диазепам быстро всасывается в пищевом канале.

Метаболизм:

· образуются продукты N-деметилирования à оксазепам à глюкуронид

· гидроксилирование диазепама à глюкуронид

Выделение из крови и мочи.

10 мл мочи/5 мл крови + равный объем фосфатного буферного раствора (рН = 7,0)à 2 раза по 5 мин взбалтывают с диэтиловым эфиром à эфирные вытяжки + NaOH à дважды взбалтываютà + вода à эфирная вытяжка + HCl à встряхивание 10 мин à отделение солянокислой вытяжки à ФЭК

Параллельно измеряют оптическую плотность диазепама, обработанного указанным выше способом. Наличие максимумов поглощения при 242 и 287 нм указывает на наличие диазепама в крови или моче.

Качественные реакции.

· Реакция с нингидрином. Р-р диазепама в этиловом спирте + 10 мг нингидрина à водяная баня + 5 мл этилового спирта à синяя окраска + 1 %-го раствора сульфата меди àкрасная.

ТСХ-обнаружение.

НФ: силикагель КСК/силуфол

ПФ: этилацетат: р-р аммиака: метиловый спирт

хлороформ: ацетон

Д: реактив Драгендорфа.

Спектральный анализ.

Диазепам в 2 н. растворе соляной кислоты имеет максимумы поглощения при 242 и 287 нм, в 0,1 н. растворе серной кислоты имеет максимумы поглощения при 241, 284 и 359 нм; в ИК-области спектра диазепам имеет основные пики при 1681, 1484 и 1313 см -1.

Оксазепам

Т1/2 = 5-15 часов.

Он представляет собой кристаллический порошок, почти не растворимый в воде, растворимый в этиловом спирте и хлороформе.

По фармакологическим свойствам оксазепам близкий к хлордиазепоксиду и диазепаму. Он менее токсичен, чем диазепам, обладает слабым противосудорожным действием и миорелаксантным эффектом.

Метаболизм. Оксазепам явдяется одним из метаболитов диазепама. После приема оксазепама максимальный уровень его в плазме достигается через 4 ч, а через 48 ч он исчезает из плазмы. Оксазепам находится в плазме в виде глюкуронида. В виде глюкуронида он выделяется с мочой, а с калом он выделяется в неизмененном виде.

Познавательные статьи:



Формы дистанционного обучения

Передача мяча двумя руками снизу

Значение правильной осанки для жизнедеятельности человека

Основные ошибки при выполнении передач мяча на месте