Материал и методы исследований.

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 4Следующая ⇒

Изучали некоторые фармакологические свойства препаратов из следующих видов шикши:                

1. Шикша чёрная Empetrum nigrum. Отвары 1:10 сухих плодов, надземной части (н.ч.), сухие экстракты 40%-ным этанолом из них, сухая этилацетатная фракция н.ч., сумма флавоноидов н.ч.

2. Шикша обоеполая Empetrum hermaphroditum. Отвары и сухие спиртовые экстракты н.ч.

3. Шикша сибирская Empetrum sibiricum. Те же препараты, что в пункте 2.

4. Шикша почтиголарктическая Empetrum subholarcticum. Те же препараты и этилацетатная фракция (сумма полифенольных соединений) н. ч.                             

Ряд препаратов, кроме приготавливаемых экстемпорально (отвары), был любезно предоставлен нам фитохимиком, профессором Томского университета Е.А.Красновым.

             Острую токсичность изучали при энтеральном 5-кратном в течение суток введении самцам (реже самкам) мышей линии SHR через зонд отваров (в пересчёте на сухое сырьё 5 г/кг х 5 раз, т.е. суммарно 25 г/кг). Сухие спиртовые экстракты, этилацетатную фракцию, сумму флавоноидов в виде 10% эмульсии на Tween-80 вводили энтерально дважды по 50 мг/кг (всего 100 мг/кг).

              Антиконвульсантную активность изучали общепринятыми методами с предварительным однократным или 7-дневным энтеральным введением мышам препаратов: отваров по 5 г/кг (в пересчёте на сухое сырьё), спиртовых экстрактов и этилацетатных фракций – по 100 мг/кг. В контроле животным вводили воду или эмульсию Tween-80 в равных объёмах (0,5 мл/10 г). Методы:

 1. Титровали судорожно-смертельную дозу коразола при медленном введении в хвостовую вену мышам по 0,1 мл 0,5% раствора коразола в 20 сек до наступления судорог.

 2. Внутрибрюшинно вводили мышам 2 мг/кг стрихнина (супрамаксимальный тест), учитывая латентный период судорог и время жизни.

3. С помощью сконструированных нами пероральных электродов [5] вызывали максимальный электрошок (25 мА, 50 гц, 0,1 сек), регистрируя количество выживших животных и без тонических судорог [29, 30].

4. На крысах линии Крушинского-Молодкиной с генетически закреплёнными аудиогенными судорогами [12, 14] сравнивали антиконвульсантную активность водных извлечений из сырья после однократного и 7-дневного энтерального введения по 5 г/кг ( в пересчёте на сухое сырьё). Опыты проведены в лаборатории генетики ВНД института физиологии РАН. Отобрали 60 крыс с выраженными (4 и 3 балла) судорожными реакциями на сильный (90 дб) звук. Убедились в том, что 7-дневное введение воды через зонд не изменяет судорожных ответов у всех животных. Затем распределили их по 4 группам для изучения действия отваров н.ч. растений. Регистрировали количество крыс с реакцией на звук в 0, 1, 2 (бессудорожные ответы), 3, 4 балла. В последующем, через 2 недели изучили действие спиртовых эктрактов из н.ч. и плодов шикши. Модель аудиогенных судорог впервые использована для изучения антиконвульсантной активности препаратов из растений.

5. Вспомогательное значение имели модели никотиновых (1 мг/кг внутривенно) судорог и ареколинового (10 мг/кг подкожно) тремора, позволявшие выявить наличие или отсутствие центрального Н- и М-холинолитического действия.

             Изучали влияние фитопрепаратов на нормальное и нарушенное исследовательское поведение мышей в открытом поле (адаптацию к новизне, павловский рефлекс «Что такое?», двигательный компонент ориентировочного рефлекса – ДКОР), подсчитывая количество посещённых четвертей поля и ориентировочных вставаний за 3 мин на арене 30 х 50 см. Нарушение ДКОР вызывали подкожной инъекцией коразола (60 мг/кг), максимальным электрошоком или умеренной, но приводящей к акинезии, не вызывающей гибели животных электротравмой. Меняющиеся параметры тока подбирали в каждом эксперименте: 8-12 мА, 3-10 сек, 50 гц. В этих 3-х методах регистрировали ДКОР через 60, 40 и 15 мин соответственно. Нарушение условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) вызывали максимальным электрошоком [7, 13] . Подсчитывали количество выживших, а также не утративших УРПИ мышей.

             Антигипоксантная активность препаратов изучена на трёх моделях: 1) гипобарическую гипоксию вызывали общепринятым методом в вентилируемой барокамере, «поднимая» мышей на высоту 10000 м за 6.5 мин; 2) гипоксия с гиперкапнией достигалась помещением 4 мышей в герметически замкнутый сосуд объёмом 0,5 л; 3) гемическую гипоксию получали с помощью метгемоглобинообразователя нитрита натрия, 2% раствор которого инъецировали мышам внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг. Сравнивали время жизни мышей в условиях гипоксии. В каждой группе использовано 20-30 мышей. Контрольным животным вводили внутрь воду или эмульсию Tween-80 по 0,5 мл/10 г, а подопытным – изучаемые препараты в ранее указанных дозах в течение 7 дней до опыта.

Все результаты обработаны статистически по адекватным критериям Фишера-Стьюдента, χ², Вилкоксона-Манна-Уитни.

Познавательные статьи:



Коммуникативные барьеры и пути их преодоления

Рынок недвижимости. Сущность недвижимости

Решение задач с использованием генеалогического метода

История происхождения и развития детской игры