Исходный уровень знаний и навыков

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 3

Структура занятия

1 Теоретическая часть

1.1 Механизм мобилизации жира (роль гормонов, цАМФ и Ca²⁺).

1.2 Свойства и физиологическая роль свободных жирныхкислот (СЖК). Транспорт СЖК в крови.

1.3 Окисление ТГ в тканях, окисление глицерина, его энергетический баланс.

1.4 Этапы b-окисления насыщенных жирных кислот. Механизм активации и транспорта жирных кислот через митохондриальную мембрану. Роль карнитина. Особенности b-окисленияненасыщенных жирных кислот и жирных кислот с нечетным числом атомов. Энергетический баланс окисления C₁₆, C₁₅, C_18:2.

1.5 Энергетический баланс окисления тристеарата. Физиологическая роль СЖК при стрессе.

1.6 Обмен ацетил-КоА (пути образования и утилизации).

1.7 Кетоновые тела – биосинтез, утилизация, физиологическая роль.

2 Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Лабораторная работа.

Задачи

1 Жирная кислота C₁₅ будет вступать в ЦТК в виде:

а) цитрата; б) сукцинил КоА; в) ацетил КоА; г) a-кетоглутарата; д) сукцината; е) малонил КоА?

2 Мембрана митохондрий проницаема для:

а) ацил-АПБ; б) ацил-КоА; в) малонил-КоА; г) ацетил-КоА; д) ни одного из названных соединений; е) всех названных соединений?

3 Гормончувствительная липаза обеспечивает:

а) гидролиз эфирных связей в гормонах;

б) адреналин-зависимый гидролиз пищевых липидов;

в) мобилизацию ТГ жировой ткани;

г) гидролиз ТГ впечени;

д) гидролиз ТГ в мозге?

4 Главным энергетическим субстратом для мозга в нормальных условиях является:

а) глюкоза; б) аминокислоты; в) кетоновыетела; г) жирные кислоты; д) молочная кислота; е) ТГ?

5 При голодании окисление СЖК или кетоновых тел приводит к торможению гликолиза в мышцах, потому что:

а) ацетил-КоА подавляет активность пируват-ДГ;

б)увеличение отношения АТФ/АДФ лимитирует гексокиназу;

в) гипоинсулинемия ограничивает потребление глюкозы мышцей;

г) увеличение отношения NADH/NAD⁺ лимитирует 3-ФГА-ДГ;

д) жирные кислоты обладают контринсулярным эффектом;

е) активируется ГНГ?

6 Кофакторы, общие как для b-окисления СЖК, так и для аэробного гликолиза, включают:

а) витамин B₁₂; б) NAD⁺; в) АДФ; г) HS-KoA; д) аскорбат; е) биотин?

7 Мобилизация липидов из депо происходит при:

а) уменьшении концентрации цАМФ;

б) увеличении концентрации цАМФ;

в) увеличении концентрации инсулина;

г) уменьшении концентрации инсулина;

д) увеличенииконцентрацииадреналина;

е) увеличении концентрации ионизированного Ca²⁺ в крови?

8 Для транспорта CH₃CO-SКоА из митохондрии в цитоплазму при биосинтезе пальмитиновой кислоты необходимо наличие:

а) карнитин-ацилтрансферазы; б) ацетил-КоА-карбоксилазы; в) КоА-гидролазы; г) АТФ-цитратлиазы; д) цитратсинтетазы; е) малонил КоА?

9 Что является ключевым метаболитом при биосинтезе кетоновых тел в печени?

а) ацетил-КоА; б) малонил-КоА; в) ацетоацетил-КоА; г) b-окси-метилглютарил-КоА; д) цитрат; е) NADH?

10 Какие из следующих ферментов необходимы дляпревращения ПВК в ацетил-КоА:

а) пируват ДГ; б) цитратсинтетаза; в) пируваткарбоксилаза; г) ФЕПКК; д) АТФ-цитрат-лиаза; е) дигидролипоат ДГ?

Лабораторная работа. Определение концентрации триглицеридов в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом

Принцип метода.

Триглицериды → глицерин + жирные кислоты (липаза);

Глицерин + АТФ → глицерил-3-фосфат + АДФ (глицерокиназа);

глицерил-3-фосфат + О₂ → диоксиацетон фосфат + 2 Н₂О₂ (ГФО)

Н₂О₂ + 4-ААР + 4-хлорфенол → хинонимин + 4 Н₂О (пероксидаза)

Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации триглицеридов в пробе.

Ход работы. Готовят опытную пробу по схеме:

Опытная проба (мл)

Сыворотка (плазма) крови

0,02

Рабочий реагент

2,0

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют в течение 5 минут в термостате при температуре 37⁰С, измеряют оптическую плотность опытной пробы против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм.

Примечание: окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранения от прямого солнечного света.

Расчёт концентрации триглицеридов (С) производят по формуле:

С = Е_оп./Е_ст. • 250 – 10 мг/100мл

или

С = Е_оп./Е_ст. • 2,85 – 0,11 ммоль/л

где Е_оп. – экстинкция опытной пробы,

       Е_ст. – экстинкция стандартной пробы,

       10 мг/100мл (0,11 ммоль/л) – поправка на содержание свободного глицерина в сыворотке (плазме) крови.

Нормы.

Нормальные величины: 13-160мг/100мл (0,14-1,82ммоль/л)

Группы риска: 160-200мг/100мл(1,82-2,29ммоль/л)

Патологические показатели: выше 200мг/100мл (более 2,29 ммоль/л)

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1.Материал лекций.

2.Кухта В.К.,Морозкина Т.С. Олецкий Э.И., Таганович А.Д. Биологическая химия .

Бином –Асар 2008. –с.229-241, 258-260.

3.Биохимия: под ред. чл.-корр. РАН, проф Е.С. Северина: М. Геотар-Медицина. 2006г. –с. 392-395, 399-409.

3 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина; 1998. С. 373–381, 388-398, 574-577.

5.Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. с.289-291, 305-310

6.Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 2004г. Т. 1.- с. 262–273. 286–294.

7.Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Флинта, 1999. с.387-410.

Занятие 15

Биосинтез липидов. Регуляция и патология липидного обмена

Цель занятия: изучить основные типы и механизмынарушений липидного обмена. Научиться определять уровень общего холестерина в крови.

Студент должен знать:

1 Механизмы регуляции углеводного обмена.

2 Механизмы нарушения обмена веществ при сахарном диабете.

3 Строение и биологическую роль желчных кислот.

4 Характеристику основных классов ЛП.

5 Метаболизм ЛП в норме.

6 Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).

7 ЦТК, его энергетический баланс.

8 Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).

Студент должен уметь:

1 Проводить исследование на фотоэлектроколориметре.

Структура занятия

1 Теоретическая часть

1.1 Биосинтез насыщенных жирных кислот. Роль ацилпереносящего белка (АПБ), пантотеновой кислоты, биотина, NADPH + H⁺ и ферментов. Источники ацетил-КоА для биосинтеза жирных кислот (ЖК). Регуляция биосинтеза ЖК.

1.2 Биосинтез триглицеридов (ТГ) и фосфатидов.

1.3 Биосинтез холестерина, его регуляция, биологическая роль холестерина. Пул холестерина в клетке, его регуляция.

1.4 Механизм регуляции липидного обмена. Гормоны, регулирующие липолиз и липогенез. Интеграция липидного и углеводного обменов.

1.5 Жироуглеводный цикл Рэндла. Цикл триглицериды – жирные кислоты. Их механизмы и физиологическое значение. Взаимоотношения кетоновых тел, СЖК и глюкозы.

1.6 Нарушение переваривания и всасывания липидов, его проявления.

1.7 Жировая инфильтрация и дегенерация печени – механизмы развития и профилактика.

1.8 Ожирение – виды, механизмы развития и осложнения.

1.9 Дислипопротеидемии. Классификация по Фридриксону, биохимическая и клинико-диагностическая характеристика основных групп.

1.10 Липидозы – наследственные нарушения липидного обмена.

1.11 Перекисное окисление липидов мембран. Механизм возникновения. Реакции, метаболиты. Биологическое значение в норме и при патологии.

1.12 Антиоксидантная защита (см. тему «Биологическое окисление»).

2 Практическая часть

2.1 Решение задач

2.2 Лабораторная работа.

Задачи

1 Кетоз является состоянием, когда в крови повышен уровень:

а) ацетил КоА; б) ацетоацетил-КоА; в) бета-оксибутирата; г) лактата; д) ацетона; е) ацетоацетата?

2 Ацетил-КоА карбоксилаза:

а) активируется цитратом; б) является лиазой; в) ограничивает скорость окисления жирных кислот; г) содержит биотин; д) является лигазой; е) является трансферазой?

3 Ацетил КоА карбоксилаза ингибируется:

а) цитратом; б) карнитином; в) авидином; г) лактальбумином; д) цианидом; е) NADH?

4 Какие кофакторы являются общими для бета-окисления и биосинтеза ЖК:

а) FAD; б) NAD⁺; в) NADP⁺; г) HS-KoA; д) биотин; е) карнитин?

5 Биосинтез ТГ высокоактивен:

а) в печени; б) мозге; в) жировой ткани; г) мышце; д) энтероцитах; е) эритроцитах?

6 При утилизации избытка глюкозы активируется биосинтез СЖК, потому что возрастает содержание:

а) ацетил-КоА; б) NADH⁺; в) NADPH⁺; г) кетоновых тел; д) гликогена; е) инсулина?

Лабораторная работа. Определение концентрации общего холестерина в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом.

Принцип метода. При гидролизе эфиров холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы (POD) перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

Ход работы.

Реагенты

Опытная проба, мл

Стандартная проба, мл

Сыворотка (плазма)

0,02

-

Рабочий реагент

2,0

2,0

Стандартный раствор холестерина

-

0,02

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (20-25⁰С) или в термостате при температуре 37⁰С. Измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Примечание. При хранении в холодильнике стандартный раствор холестерина может мутнеть. В этом случае следует нагреть раствор при 35-40⁰С до исчезновения мутности.

Расчёт концентрации (С) холестерина проводят по формуле:

С = Е_оп./Е_ст. • 5,17 (ммоль/л)

или

С = Е_оп./Е_ст. • 200 (мг/100мл)

где Е_оп. – экстинкция опытной пробы,

  Е_ст. – экстинкция стандартной пробы.

Норма.

Идеальное содержание                          < 5,2 ммоль/л

допустимое содержание                        5,2-6,5ммоль/л

Патологическое содержание                 > 6,5 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение. Увеличение содержания ХС в плазмекрови – гиперхолестеринемия – наблюдается при избыточном потреблении продуктов, богатых холестерином, механической (обтурационной) желтухе, нефрите, микседеме (гипотиреоз), диабете, атеросклерозе, сифилисе, менингитах, некоторых заболеваниях печени, а такжепри наследственных гиперхолестеринемиях.

Снижение содержания ХС в плазме (гипохолестеринемия)отмечается при голодании, анемии, туберкулезе, острых панкреатитах, паренхиматозной желтухе, лихорадочных состояниях, острых инфекционных заболеваниях, хронической сердечной недостаточности, хронической пневмонии, гипертиреозе, раковой кахексии и др.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1.Материал лекций.

2.Кухта В.К.,Морозкина Т.С. Олецкий Э.И., Таганович А.Д. Биологическая химия .

Бином –Асар 2008. –с.240-253.

3.Биохимия: под ред. чл.-корр. РАН, проф Е.С. Северина: М. Геотар-Медицина. 2006г. –с. 396-399, 409-417, 428-436.

4 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина; 1998. С. 381-388, 392-406.

5.Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. с. 291-297, 305-307

6.Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 2004г. Т. 1.- с.239-242, 287-290.

7.Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Флинта, 1999. с.387-410.

Занятие 16

Лабораторная работа. Определение концентрации липопротеидов высокой и низкой плотности в сыворотке (плазме) крови.

Принцип метода. Хиломикроны, липопротеиды очень низкой плотности (VLDL) и липопротеиды низкой плотности (LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфорновольфрамовой кислоты и Мg²⁺. После центрифугирования в супернатанте остаются только липоротеиды высокой плотности (НDL).

Ход работы.

Реагенты

Опытная проба, мл

Стандартная проба, мл

Сыворотка (плазма)

0,15

-

Осаждающий реагент

0,3

0,3

Стандартный раствор

-

0,15

Хорошо перемешать и оставить на 10 мин. при комнатной температуре. Опытную пробу отцентрифугировать в течение 10 мин. при 4 000 об./мин. Прозрачный супернатант используют для определения концентрации НDL. Определить холестерин в опытной и стандартной пробах в течение часа.

Реагенты

Опытная проба,

мл

Стандартная проба,

мл

Супернатант

0,2

-

Рабочий реагент

2,0

2,0

Стандартный раствор + осаждающий реагент

-

0,2

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре (18-25⁰С) и измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Примечание. Для анализа использовать только прозрачный супернатант. В случае мутного супернатанта (неполное осаждение) или при содержании триглицеридов в пробе более 4,0 ммоль/л следует провести повторное осаждение, увеличив объём осаждающего реагента в 2 раза. Полученный результат умножить на 2.

Расчёт концентрации (С) холестерина НDL проводят по формуле:

С = Е_оп./Е_ст. • 1,29 (ммоль/л)

или

С = Е_оп./Е_ст. • 50 (мг/100мл)

где Е_оп. – экстинкция опытной пробы,

  Е_ст. – экстинкция стандартной пробы,

Расчёт концентрации (С) LDL проводят по формуле:

С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/5] мг/100 мл

или

С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/2,2] ммоль/л

Норма.                                                            НDL

                              Мужчины                                    Женщины

Нормальные величины: > 55 мг/100мл                              > 65 мг/100мл

(1,42ммоль/л)                              (1,68ммоль/л)

Группа риска:                  35-55 мг/100мл                            45-65 мг/100мл

(0,9-1,42ммоль/л)                        (1,16-1,68ммоль/л)

Патологическое нарушение липидного обмена:

                                          <35 мг/100мл                               <45 мг/100мл

(0,9ммоль/л)                                (1,16ммоль/л)

LDL

Группа риска:                  ≥150 мг/100мл                             ≥190 мг/100мл

(3,9ммоль/л)                            (4,9 ммоль/л)

Клинико-диагностическое значение.

Познавательные статьи:



Как правильно слушать собеседника

Типичные ошибки при выполнении бросков в баскетболе

Принятие христианства на Руси и его значение

Средства массовой информации США