Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

↑

▷ Содержание

Стр 1 из 3Следующая ⇒

План занятия (практическое) № 8

Тема занятия: Определение глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами

Дисциплина: МДК 01.01Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Цели занятия:

· Изучить методы качественного определения глюкозы и кетоновых тел в моче.

План занятия:

б) Задание студентам для выполнения лабораторной работы: Качественные методы определения глюкозы и кетоновых тел в моче с помощью тест-реагентов и анализаторов методом Гайнеса-Акимова, экспресс-тестами,  Альтгаузена.

Задание на дом

Составление вопросников с ответами по теме лекций 8,9 повторить лекции и п/з № 1-7

Составление схемы по методам определения глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами.

Составить презентацию на тему  «Глюкозурии»

Гр.: качественные методы (пробы)

· Проба Ланге

· Модифицированная проба Ротеры

· Проба Легаля

· Проба Лестраде

Гр.: полуколичественные методы

· Экспресс-тесты (диагностические тест-полоски)

Принцип обнаружения кетоновых тел в моче. Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, образуя комплекс, окрашенный в розовато-сиреневый, сиреневый или фиолетовый цвет. Чувствительность проб около 50 мг/л кетоновых тел. Полуколичественную оценку результатов можно дать в интервале от 150 до 1500 мг/л.

Алгоритм 3. Определение кетоновых тел в моче с помощью пробы Ланге.

Принцип метода: Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Посуда, реактивы, оборудование:

· Химическая пробирка;

· Секундомер (часы);

· Реактивы:

1. Уксусная кислота 80%.

2. Нитропруссид натрия (свежеприготовленный 10% раствор).

3. Аммиак.

Ход исследования:

К 12 – 15 мл мочи приливают около 1 мл уксусной кислоты и около 0,5 мл раствора нитропруссида натрия. Затем наслаивают аммиак.

Интерпретация полученных результатов:

В положительном случае на границе двух жидкостей образуется фиолетовое кольцо. Кольцо может появиться не сразу, а в течение 2 – 3 мин.

Другая модификация этой пробы удобна тем, что можно использовать готовый реактив нитропруссида натрия.

Приготовление реактива: 6 г нитропруссида натрия растворяют в 100 мл 30% уксусной кислоты.

Ход исследования:

Интерпретация полученных результатов:

К 5 – 6 мл мочи прибавляют несколько капель реактива (до цвета чая) и наслаивают аммиак.

В положительном случае на границе жидкостей появляется фиолетовое кольцо.

Зарисуйте схему пробы Ланге

Алгоритм 4. Определение кетоновых тел в моче с помощью модифицированной пробы Ротеры.

Принцип метода: интенсивность окраски рабочего раствора позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче.

Посуда, реактивы, оборудование:

· Химическая пробирка;

· Секундомер;

· Реактивы:

· Нитропруссид натрия, раствор 50 г/л; готовят перед использованием.

· Аммония сульфат.

· Аммиак водный – 25% раствор.

Ход исследования:

Приблизительно 200 мг сухого сульфата аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора нитропруссида натрия тщательно смешивают в пробирке, а затем на эту смесь тщательно наслаивают 10 – 15 капель раствора водного аммиака.

Интерпретация полученных результатов:

При наличии кетоновых тел на границе раздела в течение 3 – 5 мин образуется красно-фиолетовое кольцо, интенсивность окраски которого позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче (см. таблицу).

При незначительной концентрации кетоновых тел слабое кольцо может появиться на 8 – 10 минуте.

Ориентировочная количественная оценка кетоновых тел в моче.

Интенсивность окраски

Алгоритм 7. Экспресс-тесты

К экспресс-тестам определения кетоновых тел в моче относятся: набор для экспресс-анализа ацетона в моче и диагностические полоски. Исследование проводится согласно инструкции.

· Изучите инструкцию к диагностическим тест-полоскам фирмы ФАН и БИОСЕНСОР АН, перепишите её в тетрадь;

· Получите образцы биологической жидкости и тест-полоски у преподавателя и проведите самостоятельное исследование мочи;

· Результат запишите в бланки анализа;

· Оцените полученный результат с позиции «норма-патология» и сдайте преподавателю.

Принцип определения кетоновых тел с использованием тест-полосок ФАН

Принцип основан на:

полуколичественном определении кетонов. Диагностическая зона пропитана щелочным буфером и нитропруссидом натрия, который при низких величинах ph (в щелочной среде) вступает в реакцию с ацетоуксусной кислотой и ацетоном, вследствии чего образуется комплекс коричневато-красного цвета. Интенсивность окраски прямопропорциональна количеству кетонов в исследуемой моче.

Чувствительность и специфичность:

Чувствительность зоны к ацетоуксусной кислоте составляет 0,5 ммоль/л, для ацетона – 10 ммоль/л.

Оценка теста

Цветная шкала диагностической тест полоски с 2004 года представлена 4 зонами:

1 зона: бледно-желтая – отрицательная;

2 зона: розово-бежеватого цвета – соответствует15 ммоль/л (16мг/дл);

3 зона: насыщенного бежевато-розоватого цвета –5,0 ммоль/л (53 мг/дл);

4 зона: коричневато-красного цвета – соответствует 15 ммоль/л (160 мг/дл).

Интерпретация полученных результатов: Реакция оценивается через 60 сек после погружения диагностической полоски в мочу, путем сравнения образовавшейся окраски реагентной зоны с цветовой шкалой (стандартом). Если результат лежит между двумя цветовыми квадратами, то результат оценивают по наиболее близкой по окраске зоне цветовой шкалы.

Положительным результат считается, если диагностическая зона при контакте с исследуемой мочой принимает тот или иной оттенок цветной шкалы.

Принцип определения кетоновых тел с использованием тест-полосок фирмы БИОСЕНСОР АН

Данные тест-полоски предназначены для определения двух важных показателей (глюкозы и кетоновых тел в моче), что очень важно в диагностике и контроле показателей у больных Сахарным диабетом.

1.Т щательно перемешайте мочу стеклянной палочкой;

2 Произведите отбор 10мл мочи для исследования мочевого осадка;

3 Затем возьмите строго необходимое количество тест-полосок для исследования мочи (ровно столько сколько у Вас образцом мочи);

4.Закройте пенал фабричной крышкой;

5. Опустите тест-полоску в мочу на 2-3 сек, так чтобы все реагентные зоны были в моче;

6. Выньте тест-полоску из мочи, убрав излишки жидкости ребром полоски о край посуды или промокните ребром полоски о фильтровальную бумагу;

7 Положите тест-полоску на ровную поверхность диагностическими зонами вверх;

8 Оцените полученный результат через 60 сек с цветовой шкалой (стандартом) на пенале.

9 Запишите полученный результат в бланки анализа.

Диапазон определяемых концентраций глюкозы в моче:

0,0 0,05 0,1 0,25 0,5 1,0 ≥ 2,0 %

0,0 2,8 5,6 14,0 28,0 56,0 ≥ 112,0 ммоль/л

0,0 50 100 250 500 1000 ≥ 2000 мг/дл

Диапазон определяемых концентраций кетоновых тел в моче:

Ммоль/л

0,0 0,5 1,5 4,0 8,0 ≥ 16.0 ммоль/л

Записать и выучить! Факторы, влияющие на определение кетоновых тел в моче

При оценке результатов проб на кетоновые тела в моче следует учитывать ряд факторов. Так, например, известно, что ацетоуксусная кислота в стерильной моче стабильна до 8 — 10 дней, при бактериурии или большом количестве дрожжевого грибка может полностью исчезнуть в течение 24 часов. Около 20% ацетона при комнатной температуре исчезает за 24 часа, но сохраняется в холодильнике. Поэтому важное значение имеет правильный сбор мочи, ее хранение и сроки выполнения анализа. Кроме того, кетоновые тела могут исчезать из мочи при бактериурии и invivo, что может привести к ложноотрицательным результатам.

К ложноположительным результатам может привести использование месны, фенолфталеина, метаболитов некоторых препаратов (например, леводопы и каптоприла, капотена, менса и др.); кислая моча, повышенный удельный вес мочи. Все эти факторы приводят к химическому завышению результатов анализа, то есть непосредственно влияют на химическую реакцию определения кетоновых тел в моче, а количество самих кетоновых тел в моче может быть нормальным.

Необходимо помнить, что существуют также факторы, приводящие к клиническому повышению кетоновых тел в моче, то есть непосредственно влияющих на их уровень в моче за счет воздействия на обменные процессы, связанные с образованием кетоновых тел. К таким фактором относится прием некоторых лекарственных препаратов — инозитола, метионина, метформина, фенформина, феназопиридина, эфирного наркоза, интоксикация изониазидом, изопропиловым спиртом, ацетилсалициловой кислотой.

Приложение 3

План занятия (практическое) № 8

Тема занятия: Определение глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами

Дисциплина: МДК 01.01Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Цели занятия:

· Изучить методы качественного определения глюкозы и кетоновых тел в моче.

План занятия:

б) Задание студентам для выполнения лабораторной работы: Качественные методы определения глюкозы и кетоновых тел в моче с помощью тест-реагентов и анализаторов методом Гайнеса-Акимова, экспресс-тестами,  Альтгаузена.

Задание на дом

Составление вопросников с ответами по теме лекций 8,9 повторить лекции и п/з № 1-7

Составление схемы по методам определения глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами.

Составить презентацию на тему  «Глюкозурии»

Познавательные статьи:



Техника прыжка в длину с разбега

Организация работы процедурного кабинета

Области применения синхронных машин

Оптимизация по Винеру и Калману