Чтобы доказать, что ретровирусоподобные частицы являются инфекционными, то есть они являются вирусом

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 3Следующая ⇒

Обнаружение частиц с появлением ретровирусов не является доказательством того, что такие частицы являются ретровирусами, и еще меньше доказательств того, что частица является конкретным ретровирусом. Частицы, несущие морфологические характеристики ретровирусов, встречаются повсеместно. В 1970-х годах такие частицы часто наблюдались в тканях лейкемии человека, культурах эмбриональных тканей и «в большинстве, если не во всех, человеческих плацентах». Ретровирусные частицы типа C присутствуют в «рыбе, змеях, червях, фазане, перепелах, куропатках, индюках, древесных мышах и агути», а также в «ленточных червях, насекомых... и млекопитающих». Галло прекрасно знал об этой проблеме еще в 1976 году, когда писал: «

Когда обнаруживается инфекционный агент, например вирус или бактерия, либо in vitro, либо in vivo Можно быть уверенным, что агент был введен в культуру или животное извне. Ретровирусы являются исключением. Это связано с тем, что нормальные геномы человека и животных содержат информацию, которая при соответствующих условиях приводит к синтезу ретровирусной РНК и белков или даже к сборке ретровирусных частиц, то есть к экспрессии эндогенных ретровирусов. И хотя еще в 1994 году и Галло, и Фаучи учили, что «не существует известных эндогенных ретровирусов человека», известно, что по крайней мере 1% человеческой ДНК составляет ретровирусная ДНК и что эндогенные ретровирусы присутствуют «во всех нас». Кроме того, новые эндогенные ретровирусные геномы могут возникать в результате перестройки существующих ретровирусных геномов, клеточной ДНК или того и другого, вызванных многими факторами, включая патогенные процессы. Экспрессия эндогенных ретровирусных геномов может возникать спонтанно и может быть значительно ускорена, а выход повышен в условиях, которые вызывают клеточную активацию. По словам выдающегося ретровиролога Джорджа Тодаро, «неспособность изолировать эндогенные вирусы от определенных видов может отражать ограничения методов культивирования in vitro». Эндогенно продуцируемые ретровирусы морфологически и биохимически неотличимы от экзогенных ретровирусов. Из-за этого обнаружение идентичных ретровирусов в последовательно «зараженных» культурах / сокультурах не является доказательством того, что клетки инфицированы экзогенным ретровирусом. Один метод, который может помочь решить, но не докажет, приобретают ли клетки вирус извне (экзогенно приобретенный ретровирус, инфекционный ретровирус) и не собрал ретровирус из информации, уже существующей в нормальных клетках (эндогенный ретровирус), должен проводить контрольные культуры / сокультуры параллельно с тестируемыми культурами / сокультурами. Единственная разница между тестируемой и контрольной культурами должна заключаться во введении ткани, предположительно инфицированной в тестируемые культуры. В любом другом отношении к культурам контроля следует относиться одинаково. Например:

1. поскольку обнаружение ОТ и ретровирусных генетических последовательностей, а также высвобождение ретровирусных частиц зависит от метаболического состояния клеток, физиологическое состояние клеток, используемых в контрольных культурах, должно быть как можно ближе к тестируемой культуре;
2. потому что простой акт совместного культивирования может привести к высвобождению эндогенных ретровирусных частиц, если тестируемые клетки культивируются, то же самое следует сделать и с контрольными клетками;
3. экстракты даже из нормальных нестимулированных клеток при добавлении в культуры могут усиливать эндогенную ретровирусную экспрессию. По этой причине, когда клетки-хозяева культивируют с супернатантом или материалом, который выделяется в концентрации 1,16 г / мл из культур, которые считаются инфицированными, контроли должны культивироваться с аналогичным материалом из неинфицированных культур;
4. поскольку появление эндогенного ретровируса может быть ускорено, а выход увеличен в миллион раз за счет стимуляции культур митогенами, мутагенами, химическими канцерогенами и радиацией, если на тестируемые культуры воздействуют или используют такие агенты, то же самое следует делать и в контролях;
5. во избежание предвзятости наблюдателей и в интересах науки следует проводить слепую проверку тестовых и контрольных культур / сокультур.

Познавательные статьи:



Техника прыжка в длину с разбега

Организация работы процедурного кабинета

Области применения синхронных машин

Оптимизация по Винеру и Калману