Мы поможем в написании ваших работ!
ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
|
Принципы люминисцентной вирусоскопии и методы иммунофлуоресценции.
Содержание книги
- История открытия вирусов и задачи вирусологии. Роль отечественных и зарубежных ученых в развитии этой науки.
- Токсические свойства вирусов.
- Отбор патматериала, консервирование, составление сопроводительного документа, доставка материала.
- Приготовление рабочей суспензии из патматериала, методы очистки вируса.
- Методы консервирования вирусного материала.
- Устойчивость вирусов к физическим, химическим, биологическим факторам. Механизм действия их на вирусы.
- Понятие о культуре клеток. Их классификация и практическое применение.
- Принципы люминисцентной вирусоскопии и методы иммунофлуоресценции.
- Сущность, методика постановки и учета реакции нейтрализации и биопроба по типу РН.
- Генетика вирусов (наследственность и изменчивость), роль нуклеиновых кислот в сохранении и передаче наследственных признаков вирусов.
- Особенности вирусной инфекции. Пути проникновения вирусов в организм животного и в чувствительные клетки макроорганизмов, распространение и выделение вирусов из организма.
- Роль видового и возрастного фактора при вирусных заболеваниях.
- Иммуноглобулины и категории противовирусных антител.
- Иммунологические механизмы противовирусной защиты
- Иммунопрофилактика. Принцип приготовления и контроля живых вирусвакцин.
- Иммунодиагностика. Принципы изготовления и контроля вирусных диагностикумов.
- Принципы изготовления и контроля инактивированных вирусвакцин.
- Понятие о сыворотках реконвалесцентов, их получение и значение, применение.
- Противовирусные химиотерапевтические препараты и их применение.
- Возбудитель болезни Ауески, характеристика, методы специфической диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель оспы птиц, его характеристика, методы диагностики, биопрепараты.
- Формирование оспин в коже проходит ряд определенных стадий:
- Возбудитель оспы коз, характеристика, методы диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель оспы крупного рогатого скота и лошадей, характеристика, методы диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель миксоматоза кроликов, свойства вируса, диагностика болезни, биопрепараты.
- Возбудитель гриппа лошадей, характеристика болезни и вируса, биопрепараты и меры борьбы
- Возбудитель гриппа свиней, характеристика, диагностика, меры борьбы.
- Возбудитель чумы крупного рогатого скота, его характеристика болезни и вируса, методы диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель вирусной диареи крупного рогатого скота, характеристика болезни и вируса, методы диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, характеристика болезни и вируса, методы диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель парагриппа крупного рогатого скота, его характеристика, методы диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, характеристика болезни и вируса, биопрепараты
- Возбудитель контагиозной эктимы овец и коз, характеристика болезни и вируса, диагностика, биопрепараты.
- Возбудитель катаральной лихорадки овец («синий язык»), характеристика, методы специфической диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель чумы свиней, характеристика болезни и вируса, диагностика и биопрепараты.
- Факторы передачи возбудителя — корм, пастбища, транспортные средства, загрязнённые выделениями больных животных.
- Клинические признаки и патологоанатомические изменения
- Возбудитель вирусного гастроэнтерита свиней, характеристика болезни и вируса, методы диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель инан (инфекционной анемии лошадей), его характеристика болезни и вируса, методы диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель ринопневмонии лошадей, характеристика болезни и вируса, лабораторные методы диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель африканской чумы однокопытных, его характеристика, диагностика и биопрепараты.
- Возбудитель чумы плотоядных, характеристика болезни и вируса, методы диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель инфекционного гепатита собак, характеристика болезни и вируса, методы диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель энзоотического энцефалита пушных зверей, характеристика болезни и вируса, диагностика и биопрепараты
- Возбудитель ньюкаслской болезни, характеристика болезни и вируса, методы лабораторной диагностики, биопрепараты.
- Возбудитель инфекционного бронхита птиц, его характеристика, диагностика и биопрепараты.
- Возбудитель инфекционного ларинготрахеита, методы специфической диагностики и биопрепараты.
- Возбудитель болезни марека, характеристика болезни и вируса, методы специфической диагностики, биопрепараты.
Вирусоскопия люминесцентная - метод выявления вирусов или вирусоспецифических антигенов с помощью люминесцирующих антисывороток.
Сущность явления люминесценции – при поглощении различных видов энергии молекулами некоторых веществ их атомы переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения.
Многие микроорганизмы обладают собственной флуоресценцией (первичной), однако ее интенсивность мала. Поэтому используются флуорохромы - специальные вещества, которые могут поглощать свет и являются люминесцентными (вторичная флуоресценция). Отечественная промышленность выпускает более 30 различных флуорохромов-люминесцентных красок (люминофоров), но не все они пригодны для мечения антител. В России наиболее часто применяются изоционат флуоресцеина или изотиоционат флуоресцеина, дающий зеленую флуоресценцию, изоционат родамина В или изотиоционат родамина В - оранжевая флуоресценция, и некоторые другие красители. Реже применяют алфадиметилесульфохлорид, дающий слабое желтое свечение.
Люминесцентный микроскоп оснащен специальной осветительной системой, которая излучает свет, вызывающий соответствующее свечение объектов.
Провоцировать подобное свечение объектов рекомендуется либо ультрафиолетом, либо сине-фиолетовыми лучами. Таким образом можно получить цветное изображение.
При помощи данной технологии меченные флуорохромами антитела идентифицируют антигены чужеродных организмов.
Иммунофлуоресценция.
Прямая иммунофлуоресценция – обнаружение вирусных антигенов в интересующем образце окрашиванием со специфическим меченым флуоресцином антивирусным антителом.
Срез замороженной ткани, клеточный мазок или клеточный монослой на покровном стекле обычно фиксируется метанолом или ацетоном и заливается флуоресцином, конъюгированным с противовирусным антителом. Затем несвязанные антитела отмывают. Клетки исследуют при помощи световой микроскопии, используя мощный источник ультрафиолетового света. Зеленый свет, выделяемый образцом, обнаруживается при помощи встроенного в окуляры фильтра, который поглощает весь случайный ультрафиолетовый и голубой свет.
Непрямая иммунофлуоресценция- противовирусные антитела являются не мечеными. Они связаны с антигеном и их распознают при помощи конъюгированного с флуоресцином антииммуноглобулина. Респираторные инфекции, вызванные парамиксовирусами, ортомиксовирусами, аденовирусами и герпесвирусами, определяются благодаря быстрой диагностики при помощи иммунофлуоресценции.
Также этот метод может применяться в отношении тканей, например, при биопсии для диагностики герпесвирусных заболеваний или при аутопсии для подтверждения бешенства животного, умерщвленного после укуса человека.
ВОПРОС 25.
Методы серологической диагностики вирусных болезней.
Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследуемом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этой цели исследуют парные сыворотки крови больных животных, для получения которых от каждого животного кровь для исследования на наличие специфических антител берут дважды с интервалом в 2—3 нед: в начале заболевания (в острой фазе) и в конце его (в период выздоровления — реконвалесценции).
Серологические реакции: 1. Реакция связывания комплемента.2. Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты (РНАг, РНАт).3. Реакция торможения гемагглютинации.4. Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах),ИФА и тд.
ВОПРОС 26.
|
