Глава 2. Экспериментальная часть

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 6 из 7Следующая ⇒

Объектом изучения служил сбор «Арфазетин», производитель ОАО «Красногорсклексредства», серия 10112

В качестве экстрагента при получении извлечения использовался спирт этиловый 70%.

Аппаратура, используемая в работе

. перколятор

. аналитические весы

. весы ручные

. сушильный шкаф

. центрифуга

. спиртомер бытовой ДИАС

Задачами для выполнения работы было создание новой лекарственной формы (водно-спиртовое извлечение из сбора «Арфазетин»), ее качественный и количественный анализ, проведение испытаний согласно общей фармакопейной статье ГФ XI издания «Настойки», а также сравнительный анализ содержания действующих веществ в полученном водно-спиртовом извлечении и водном извлечении, изготовленном согласно инструкции к медицинскому применению сбора.

Методика получения настойки

Для получения настойки использовали:

.   Лекарственный растительный сбор «Арфазетин»

.   Экстрагент - спирт этиловый 96%, разведенный до концентрации 70% согласно ГФ XI.

Разведение спирта производилось согласно таблице, указывающей в целых числах весовые (в граммах) количества воды и спирта различной крепости, которые необходимо смешать, чтобы получить 1 кг спирта крепостью 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% и 92% ГФ XI издания.

Спирт этиловый 96% - 665,0 г

Вода очищенная - 335,0 г

Таким образом, для приготовления 200 мл 70% спирта этилового необходимо взять: 133,0 г спирта этилового 96% и 67,0 г воды очищенной.

Для получения водно-спиртового извлечения использовали соотношение сырье: экстрагент - 1:10.

Получение настойки осуществляли методом перколяции в 3 стадии:стадия - намачивание сырья. 20,0 г сбора «Арфазетин», поместили в емкость для намачивания, залили 200 мл спирта этилового 70% и оставили на 4-5 часов, предварительно закрыв ёмкость. За этот период осуществляется капиллярная пропитка сырья, происходит образование концентрированного внутриклеточного сока (первичного сока).стадия - мацерационная пауза (настаивание). Набухший материал загрузили в мешок из фильтрующего материала, поместили в перколятор на ложное дно с оптимальной плотностью, чтобы в сырье оставалось как можно меньше воздуха; наверх положили груз, чтобы максимально вытеснить воздух, затем сырье залили экстрагентом до образования «зеркала», высота слоя над сырьем получилась равной 30 мм. Настаивание осуществляли в течение 48 часов для наиболее полного извлечения действующих веществ. На этой стадии происходит выход экстрактивных веществ в экстрагент, образуется пограничный слой.стадия - перколация. Осуществили процеживание экстрагента через слой сырья.

Очистку полученного нового извлечения производили отстаиванием при температуре 8⁰C в течение 24 часов до получения прозрачной жидкости, осадок (5 мл) сливали. Объём извлечения на выходе получился 170 мл.

Общие испытания проводили согласно общей фармакопейной статье ГФ XI издания «Настойки».

.   Проверку органолептических признаков проводили визуальным методом - оценивали вкус, цвет и запах извлечения. В результате испытания обнаружили - вкус специфический горьковато-сладкий, соответствующий компонентам, входящим в состав сбора, цвет красновато-коричневый, запах характерный, резкий, ароматный.

.   Количественное определение спирта проводили, используя спиртомер (ALCOHOLOMETER) бытовой ДИАС 0 - 96% об., по следующей методике: во флакон 100 мл с исследуемым извлечением, наполненным на 2/3, плавно опускали спиртомер таким образом, чтобы прибор не касался стенок и дна флакона. После того как спиртометр установился в стационарном положении, наблюдали по шкале содержание спирта в исследуемом водно-спиртовом извлечении по линии совмещения нижнего мениска жидкости с делением шкалы. В результате эксперимента установили, что концентрация спирта этилового составила 67%.

3. Содержание экстрактивных веществ <http://ztl.pp.ua/html/medication/gloss.html> (сухого остатка) определяли по методике ГФ XI: 5 мл настойки поместили во взвешенный бюкс высотой 2-3 см и диаметром 5-7 см, выпарили на водяной бане, затем высушили в сушильном шкафу при температуре 100-105⁰С в течение 3 часов до постоянной массы.

В результате эксперимента удалось определить, что содержание сухого остатка в извлечении: составляет 0,2624±0,000252 г.

4. Содержание тяжелых металлов <http://ztl.pp.ua/html/medication/gloss.html> определяли по методике: к 10 мл извлечения прибавляли 1 мл разведенной уксусной кислоты, 2 капли раствора сульфида натрия, перемешали и через 1 минуту сравнили с эталоном, состоящим из 10 мл 0,00005% раствора ацетата свинца и такого же количества реактивов, какое добавлено к испытуемому раствору. Наблюдение окраски производили по оси пробирок диаметром около 1,5 см, помещенных на белой поверхности. Окраска, появившаяся в испытуемом растворе, не превышала эталон, была заметна лишь слабая опалесценция от серы, выделяющейся из сульфида натрия.

Качественный анализ действующих веществ проводили по следующим методикам:

) Обнаружение дубильных веществ согласно ГФ XI издания: к 2 мл извлечения добавляли несколько капель раствора железоаммониевых квасцов, результатом эксперимента явилось черно-зеленое окрашивание раствора.

) Обнаружение органических кислот также проводили согласно методикам в ГФ XI издания:

Щавелевая кислота: к 2 мл извлечения добавили 4 капли раствора кальция сульфата насыщенного, в результате образовался осадок растворимый в соляной кислоте и не растворимый в уксусной кислоте.

Янтарная кислота: к 1 мл извлечения добавили несколько кристалликов резорцина, затем по стенке пробирки добавили 0,5 мл концентрированной серной кислоты, охладили и добавили 0,5 мл 10% раствора гидроксида аммония, зеленая флуоресценция не появилась.

Лимонная кислота: 1 мл извлечения помещали в выпарительную чашку, добавляли несколько кристалликов ванилина и выпаривали досуха. К остатку добавляли 2 капли концентрированной серной кислоты, нагревали на водяной бане, в результате реакции появилось фиолетовое окрашивание.

Яблочная кислота: к 2 мл извлечения добавили 0,1 мл β-нафтола и 1каплю концентрированной серной кислоты. Опустили пробирку на 1/2 мин в кипящую водяную баню, в результате реакции наблюдалась ярко-желтая с зеленым флуоресценция.

Винная кислота: 4 капли извлечения выпаривали досуха в фарфоровой чашке, добавляли 1 мл концентрированной серной кислоты и несколькими кристалликами резорцина, нагревали на водяной бане, в результате реакции вишнево-красное окрашивание не появилось.

) Качественное обнаружение полисахаридов проводили согласно методике (ГФ XI): К 10 мл извлечения прибавляли 30 мл 95 % спирта и перемешивали; появились хлопьевидные сгустки, выпавшие в осадок при стоянии. Затем часть осадка переносили в пробирку, прибавляли 2 мл разведенной хлористоводородной кислоты, нагревали на водяной бане, затем прибавляли 10 мл реактива Фелинга и снова нагревали. В результате реакции образовался оранжево-красный осадок.

) Качественное обнаружение флавоноидов проводили согласно ГФ XI издания:

. общей реакцией на флавоноидные соединения является цианидиновая проба - 10 мл извлечения выпаривали до объема 2 мл, прибавляли 3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, затем добавляли 0,05 г цинковой пыли и нагревали на водяной бане до кипения. В результате реакции жидкость приобрела красный цвет.

. взаимодействие со щелочами: к 10 мл извлечения добавляли 2 мл NaOH, наблюдалось желтое окрашивание.

Количественное определение извлечения проводили на органические кислоты, дубильные вещества, полисахариды и флавоноиды в соответствии с методиками, регламентированными ГФ XI (выпуск 2).

)   Содержание органических кислот определяли методом алкалиметрии по методике: 5 мл извлечения помещали в колбу на 500 мл, прибавляли 200 мл воды очищенной, 1 мл 1% спиртового раствора фенолфталеина, 2 мл 0,1% метиленового синего и титровали 0,1 моль/л натрия гидроксидом до появления лилово-красной окраски.

Содержание свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту в процентах вычисляли по формуле (1):

 (1)

,0067 - титр;- объем титранта, мл;

К - коэффициент пересчета;

Х - процентное содержание органических кислот.

Получили следующие данные: V_ср = 3,47 мл

Процентное содержание органических кислот в водно-спиртовом извлечении составило 0,4649 ± 0,002498%

) Содержание дубильных веществ определяли методом перманганатометрии по методике:25 мл извлечения помещали в колбу на 1 л., прибавляли 500 мл воды очищенной, 25 мл раствора индигосульфокислоты и титровали при постоянном перемешивании 0,02 моль/л раствором калия перманганата до золотисто-желтого окрашивания.

Содержание дубильных веществ в пересчете на танин вычисляли по формуле (2):

(2)

Х - процентное содержание дубильных веществ;₁ - объем титранта₂ - объем, пошедший на титрование в контрольном опыте

,004157- титркоэффициент пересчета

В результате эксперимента были получены следующие данные:₁=8,23 мл; V₂ =2,12 мл

Процентное содержание дубильных веществ в водно-спиртовом извлечении составило 1,306 ± 0,00225%

) Содержание полисахаридов определяли по методике: 25 мл извлечения помещали в центрифужную пробирку, прибавляли 75 мл 95% спирта, перемешивали, подогревали на водяной бане до 30⁰С в течение 5 минут. Через час содержимое центрифугировали с частотой вращения 5000 об/мин в течение 30 минут. Осадок количественно перенесли на фильтр и последовательно промывали 15 мл раствора 95% спирта в воде (3:1), 10 мл ацетона, 10 мл этилацетата. Фильтр с осадком высушивали сначала на воздухе, затем при температуре 100-105⁰Сдо постоянной массы.

Содержание полисахаридов в процентах (Х) вычисляли по формуле (3):

(3)

₁- масса фильтра в граммах;₂- масса фильтра с осадком в граммах;объем извлечения

В результате исследования были получены следующие данные:(1)=1,0289 г, m(2)=2,3807 г.

Процентное содержание полисахаридов в водно-спиртовом извлечении составило 5,4072 ± 0,00411%

) Содержание флавоноидов определяли методом спектрофотометрии по методике: 2 мл извлечения помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 2 мл 5% раствора алюминия хлорида, 6 капель кислоты хлористоводородной разведенной, доводили объем раствора до метки 95% спиртом этиловым и перемешивали. Через 45 минут измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали смесь, состоящую из 2 мл извлечения, 6 капель кислоты хлористоводородной разведенной и доведенной 95% этанолом в мерной колбе до 25 мл. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора РСО рутина в 95% спирте этиловом.

Приготовление раствора РСО рутина: около 0,025 г (точная навеска) рутина, предварительно высушенного при температуре 130-1350С в течение 3-х часов, растворяли в мерной колбе вместимостью 50 мл в 95% спирте этиловом. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляли 1 мл 5% раствора алюминия хлорида и 6 капель кислоты хлористоводородной разведенной и доводили до метки 95% спиртом этиловым.

Содержание суммы флавоноидов (Х) в пересчете на рутин определяли по формуле (4):

 (4)

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;₀ - оптическая плотность раствора РСО рутина;- объем извлечения, мл;- навеска РСО рутина, г;

(рутина)=0,0257г₀ = 0,402= 1,124

В результате исследования установили, что содержание флавоноидов в анализируемом извлечении в пересчете на рутин составило 1,7964±0,00145%

Количественное содержание всех действующих веществ в полученном водно-спиртовом извлечении представлено на рисунке 2.

Рисунок 2 - Количественное содержание действующих веществ в полученном водно-спиртовом извлечении

Для проведения сравнительного анализа содержания действующих веществ в настойке, использовали данные количественного содержания органических кислот (0,084%), дубильных веществ (0,285%) и полисахаридов (1,966%) в водном извлечении, изготовленном согласно инструкции к медицинскому применению сбора «Арфазетин», полученные ранее при выполнении дипломной работы Куликовой С.И. на кафедре УЭФ Тверской ГМА в 2011 году.

В результате сравнительного анализа содержания органических кислот было установлено, что в водно-спиртовом извлечении их процентное содержание составило 0,4649±0,002498%, что в 5,5 раза больше, чем в водном извлечении (0,084%) (рисунок 3)

Рисунок 3 - Сравнительная характеристика количественного содержания органических кислот в полученном водно-спиртовом извлечении и водном извлечении, изготовленном согласно инструкции к медицинскому применению сбора

В результате количественного анализа дубильных веществ было установлено, что в водно-спиртовом извлечении их процентное содержание составило 1,306±0,00225%, что в 4,6 раза больше, чем в водном извлечении (0,285%) (рисунок 4).

Рисунок 4 - Сравнительная характеристика количественного содержания дубильных веществ в полученном водно-спиртовом извлечении и водном извлечении, изготовленном согласно инструкции к медицинскому применению сбора

В результате количественного анализа полисахаридов было установлено, что в водно-спиртовом извлечении их процентное содержание составило 5,4072±0,00411%, что в 1,24 раза больше, чем в водном извлечении (4,362%) (рисунок 5).

Рисунок 5 - Сравнительная характеристика количественного содержания органических кислот в полученном водно-спиртовом извлечении и водном извлечении, изготовленном согласно инструкции к медицинскому применению сбора

Познавательные статьи:



Организация работы процедурного кабинета

Статус республик в составе РФ

Понятие финансов, их функции и особенности

Сущность демографической политии