Одновременное определение эуглобулинового фибринолиза и анти-плазминовой активности (по L. Dormer, 1959; Н. А. Шилко, 1966; Е. П. Иванову, 1971).

↑

▷ Содержание

⇐ ПредыдущаяСтр 4 из 4

Принцип: По результатам раздельного определения времени лизиса эуглобулиновои фракции в двух пробах, в одну из которых добавляют изотонический раствор хлорида натрия, а в другую — сыворотку исследуемого, оценивают фибринолитический потенциал и антифибринолитические свойства плазмы больного.

Реагенты, и оборудование: Те же, что и в других методах оценки эуглобулинового фибринолиза, а также сыворотка исследуемого, капилляры объемом 0,02 мл.

Ход определения: 0,5 мл плазмы приливают к 4,5 мл дистиллированной воды и смешивают. Добавляют 0,15 мл 1 % раствора уксусной кислоты и также хорошо смешивают. Смесь оставляют на 30 мин в среде при +4 °С, затем ее центрифугируют 5 мин со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Стенки пробирки тщательно осушивают фильтровальной бумагой. Осадок растворяют в 1 мл боратного буфера. Раствор разливают в 3 пробирки по 0,3 мл. В первые две пробирки, в которых исследуется эуглобулиновыи лизис, добавляют по 0,1 мл 0,9 % раствора хлорида натрия, в третью пробирку — 0,03 мл сыворотки исследуемого (ингибиторы антиплазмина). Тщательно смешивают содержимое пробирок и ставят их в термостат при 37 °С на 1—2 мин, а затем в каждую пробирку добавляют по 0,3 мл смеси растворов 0,025 М хлорида кальция и 0,9 % раствора хлорида натрия (1:1). Отмечают время растворения сгустка с момента его образования до момента полного растворения. Для этого пробирки просматривают через каждые 30 мин.

Оценка результатов: Увеличение антиплазминовой активности будет свидетельствовать о повышении активного потенциала плазминовой системы в организме, как правило, вследствие снижения уровня антиплазминов и, реже, нарастания количества активных компонентов плазмина. В некоторых ситуациях из-за этого у больных появляются признаки кровоточивости. При снижении антиплазминовой активности уменьшается активный плазминовый потенциал вследствие уменьшения активных компонентов (активаторов пяазминогена и др.) крови или роста ее плазминовой активности. В результате усугубляется предтромботическое и гиперкоагуляционное состояние крови.

Определение Хагеман-зависимого фибринолиза (по А. Г. Архипову и Г. Ф. Еремину, 1985).

Принцип: В основе метода положена максимальная стандартизованная активация фактора XII при 37 °С путем добавления к исследуемой плазме каолина.

Исследуемый образец: Цитратная плазма.

Реактивы: 1. легкий каолин в дистиллированной воде (10 г/л); 2. дистиллированная вода; 3. 0,17 М уксусная кислота; 4. буфер Михаэлиса, рН 7,4; 5. 0,025 М хлорид кальция.

Ход определения: К 0,5 мл нитратной плазмы добавляют 7,75 мл дистиллированной воды, 0,25 мл суспензии легкого каолина в дистиллированной воде и 0,15 мл уксусной кислоты. Смесь прогревают при 37 °С в течение 30 мин. Затем ее центрифугируют в течение 5 мин при 300 g. Надосадочную жидкость удаляют, пробирку осушивают путем опрокидывания на фильтровальную бумагу. Осадок эуглобулинов растворяют в 0,5 мл буфера Михаэлиса. К 0,2 мл растворенного осадка прибавляют 0,2 мл 0,025 М хлорида кальция и пробирку ставят в термостат при 37 °С. Через 1 мин образуется сгусток. Определяют время лизиса сгустка по моменту полного просветления раствора.

Нормальные величины: у мужчин 18—38 лет 3,9—11,9 и женщин того же возраста 4,3—12,7; у мужчин и женщин 39—59 лет соответственно 5,4—12,6 и 5,0 - 13,0; 60 лет и старше соответственно 6,2—13,6 и 4,2—13,8, соответственно.

Примечания: Возможна графическая регистрация лизиса сгустка гемокоагулографом. Хагеман-зависимый фибринолиз не зависит от количества фибриногена и тромбоцитов в эуглобулиновой фракции. У больных крупозной пневмонией, особенно осложненной инфекционно-токсическим шоком и ДВС-синдромом, у больных тромбозом вен нижних конечностей, то есть с органной или региональной фибринацией (гиперкоагуляционно-тромботической формой ДВС-синдрома) резко ослаблен Хагеман-зависимый фибринолиз вследствие истощения или нарушения активации плазминогена. Активность Хагеман-зависимого фибринолиза можно определять для диагностики тромбозов сосудов макро-и микроциркуляции.

В педиатрической практике и при обследовании новорожденных целесообразно использовать

Познавательные статьи:



Техника нижней прямой подачи мяча

Комплекс физических упражнений для развития мышц плечевого пояса

Стандарт Порядок надевания противочумного костюма

Общеразвивающие упражнения без предметов