Лабораторная диагностика туберкулеза

Исследуемый материал мокрота, промывные воды бронхов и желудка, плевральная и цереброспинальная жидкости, моча, меструальная кровь, асиитическая жидкость, ткани и органы, взятые на исследование во время операции или биопсии.

Методы обогащения: Флотация – к исследуемому материалу добавляют ксилол или бензол, микобактерии, содержащие до 30% липидов концентрируются на поверхности. Гомогенизация обработкой щелочами, муколитиками,центрифугирование и микроскопия осадка.

Бактериоскопический метод: окраска по Цилю-Нильсену и люминисцентная микроскопия.

M. tuberculosis в мокроте Окраска по Цилю-Нельсену. Увеличение х1000

M. tuberculosis Мазок мокроты в люминисцентном микроскопе. Окраска акридиновым оранжевым Увеличение х1000

Бактериологический метод Мокрота ® Гомогенизация и обработка 5% серной кислотой ® Посев на среду Левенштейна-Йенсена ® Инкубация 2-4 недели при 37⁰С ® Учет результатов (культуральные, тинкториальные и морфологические свойства) ® Определение чувствительности к антибиотикам методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна- Йенсена:

Питательные среды и условия культивирования среды, содержащих яичный желток: Левенштена-Йенсена. Финна и Огавы, а также жидкие среды Мидлбрук 7Н9 бульон и бульон Сулла.

Характер и скорость роста Растут медленно, первые признаки роста на 21 день, в виде светло кремового, белого или бледно-желтого чешуйчатого налета с неровными краями (R-форма колоний), бородавчатый вид, напоминая цветную капусту. На жидких средах через 5—7 дней дает рост в виде толстой твердой сухой бугристо-морщинистой пленки кремового цвета (цвет слоновой кости).

Определение чувствительности к антибиотикам методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна - Йенсена:

Примечание: (+) - наличие роста; (-) - отсутствие роста.

Вывод: Суточная доза с трептомицина 15 мкг/кг, ПАСК- Т 1 мкг/кг поэт ому M. tuberculosis устойчив к парааминосалициловой кислоте (МИК >100 мкг/мл)., но чувствителен к стрептомицину (МИК 10 мкг/мл).

Общая продолжительность исследования 1,5-2 мес. или 60 дней.

Микрокультура микобактерий туберкулеза с корд-фактором (trehalose 6,6-dimycolate высоко вирулентен) Окраска по Цилю-Нельсену х630.

Ускоренное исследование (принцип метода) BD BACTEC™ MGIT™ 960 - автоматизированный комплекс: детекции микобактерии в жидкой среде Мидлбрук 7Н9 3-15 дней, определение чувствительности к АБП 1 ряда (стрептомицин, изониазид, рифампицин, этамбутол) 7-9 дней; высеваемость 94%; Пробирка MGIT с флуоресцентным индикатором роста на дне, погашенным высокими концентрациями О². Размножаясь микобактерии поглощают кислород, флюоресцентный компонент начинает светиться при УФ облучении. BACTEC выявляет 100 000 бактерий в 1 мл.Средняя продолжительность 21 день ПЦР и гибридизации ДНК с применением микробиочипов.