Мы поможем в написании ваших работ!
ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
|
Роль мутаций, рекомбинаций и селекции в эволюции микроорганизмов. Генная инженерия и аспекты ее практического использования.
Содержание книги
- Работы Р.Коха и их значение для микробиологии и инфекционной патологии.
- Методы микроскопии; с иммерсионным объективом, в темном поле, фазово – контрастная, люминесцентная микроскопия. Электронный микроскоп.
- Формы бактерий. Морфология, ультраструктура, химический состав бактериальной клетки. Основные отличия прокариот от эукариот. Субклеточные формы бактерий; протопласты, сферопласты, L-формы бактерий.
- Спирохеты: классификация, морфология и физиология. Патогенные представители разных родов (названия по-латыни).
- Микроскопические грибы. Классификация, строение разных групп и патогенные представители.
- Морфология и химический состав вирусов. Отличие вирусов от других организмов. Методы культивирования вирусов. Культуры клеток и их характеристика.
- Питание бактерий. Типы питания. Механизмы переноса веществ в клетку. Факторы роста микроорганизмов.
- Ферменты микробов. Классификация по биологической роли и субстратной специфичности; использование для идентификации микробов.
- Дифференциально – диагностические среды: перечислить основные виды, принципиальный состав, назначение и использование в практике.
- Влияние внешней среды на микроорганизмы. Влияние физических факторов: температуры, лучистой энергии, высушивания. Метод лиофильного высушивания.
- Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике, антисептике. Методы стерилизации и их характеристика: аппараы, действующее начало, режим стерилизации, стерилизуемые объекты.
- Микрофлора воды, почвы, воздуха. Санитарно-показательные микроорганизмы. Выживаемость патогенных микробов во внешней среде. Некультивируемые формы бактерий. Значение для медицинской практики.
- Генетический аппарат бактерий и его особенности у вирусов. Понятие о генотипе и фенотипе микроорганизмов. Символические обозначения генотипических и фенотиических признаков.
- Виды изменчивости (наследственная и ненаследственная). Начертить схему. Мутации, их разновидности. Мутагены физические, химические и биологические.
- Генетический обмен у микроорганизмов (рекомбинации): виды рекомбинаций и их характеристика; плазмиды-определение понятия, основные виды и их характеристика.
- Роль мутаций, рекомбинаций и селекции в эволюции микроорганизмов. Генная инженерия и аспекты ее практического использования.
- Изменчивость микробов и значение ее в диагностике, терапии и профилактике инфекционных заболеваний.
- Пути проникновения микроорганизмов в организм (ворота инфекции). Динамика развития инфекционного процесса, периоды. Антропонозы, зоонозы, антропозоонозы – определение понятий.
- Неспецифические факторы защиты организма: определение понятия, поверхностные покровы, гуморальные и клеточные факторы; роль нормальной микрофлоры.
- Антигенная структура бактериальной клетки: обозначение, расположение, характеристика, получение, практическое применение. Групповые и видовые антигены микробов. Антигенная структура вирусов.
- Иммунная система организма. Иммунокомпетентные органы, клетки и их основные функции, субпопуляции Т-лимфоцитов и их функции. Клеточный и гуморальный иммунитет.
- Механизм иммунного ответа. Взаимодействие Т- и В-лимфоцитов и макрофагов. Их роль в клеточном и гуморальном иммунитете.
- Антитела, иммуноглобулины, их основные свойства. Специфичность антител.
- Механизмы соединения антитела с антигеном и реакции иммунитета. Виды антител. Моноклональные антитела: принципиальная схема получения, преимущество и практическое применение.
- Преципитины и реакция преципитации; механизмы и ингредиенты; получение преципитирующих сывороток антигенов. Способы постановки; практическое применение.
- Реакция с применением меченых антител и антигенов; реакция иммунофлюоресценции, ифа, радиоиммунный анализ.
- Применение реакции иммунного ответа для диагностики вирусных заболеваний (реакция нейтралиациии вирусов, гемагглютинации, торможения гемагглютинации, гемадсорбции). Ифа, иммуноблоттинг.
- Методы профилактики и терапии токсинэмических инфекций. Препараты; показания к применению.
- Патогенные вибрионы: морфология и физиология, классификация и их свойства. Биовары. Антигенная структкра и классификация. Патогенез холеры. Лабораторная диагностика.
- Кампилобактерии, физиология, классификация, факторы патогенности и патогенез заболевания. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения и профилактики.
- Стрептококки пневмонии: морфология и физиология, антигенная структура (серологические группы), роль в патологии человека. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение.
- Неспорообразующие анаэробы: классификация, морфология и физиология. Основные особенности клинической картины. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения.
- Микобактерии туберкулеза: морфология, физиология, особенности окраски и культивирования. Лабораторная диагностика. Особенности иммунитета. Аллергические пробы. Препараты для профилактики и лечения.
- Характеристика возбудителя легионеллеза, особенности его экологии, пути передачи, формы инфекции, лабораторная диагностика, лечение и профилактика.
- Патогенные грибы: классификация, морфология и физиология. Микозы. Дерматомикозы. Кандидозы. Лабораторная диагностика. Противогрибковые препараты.
- Ортомиксовирусы: структура вирионов вируса гриппа, классификация. Изменчивость вирусов и ее механизмы. Иммунитет. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения и специфической профилактики.
- Вирус эпидемического паротита (свинки)
Мутации микроорганизмов могут иметь важное практическое значение. Получены штаммы-мутанты грибов и актиномицетов, являющиеся продуцентами антибиотиков во много раз более активных, чем исходные культуры. Из мутантов с ослабленной вирулентностью могут быть получены вакцинные штаммы для получения живых вакцин.
При микробиологической диагностике инфекционных заболеваний возникают затруднения в определении вида атипичных микробов, например, бактерий дизентерии, не агглютинирующихся сыворотками. Для их идентификации приходится применять другие методы.
В процессе лечения больных инфекционными болезнями создаются препятствия в виде устойчивости возбудителей к антибиотикам, и требуются специальные методы для преодоления лекарственной устойчивости. Селекция в условиях стационаров штаммов микроорганизмов, обладающих множественной лекарственной устойчивостью и высокой вирулентностью для человека, привело к формированию так называемых «госпитальных» штаммов, вызывающих внутрибольничныс инфекции. Такие штаммы известны среди стафилококков, а также среди сальмонелл и других грамотрицательных палочек.
Методами направленной мутации и селекции получены живые вакцины, с успехом применяющиеся для профилактики инфекционных болезней.
Достижения молекулярной генетики используются для современных методов идентификации микробов: методы индикации нуклеиновых кислот, полимеразная цепная реакция (ПЦР). Полимеразная цепная реакция является высокочувствительной реакцией, т.к. позволяет увеличить число копий исследуемой цепи ДНК в сотни тысяч раз за несколько часов. ПЦР может быть использована особенно тогда, когда в исследуемом материале имеется очень малые концентрации возбудителя или трудно выделить чистую культуру, а также при его высокой антигенной изменчивости.
Генетическая инженерия основана на создании рекомбинантных организмов, содержащих встроенные в их хромосому гены, кодирующие продукцию необходимых для производства соединений.
Последовательные этапы рекомбинации:
1) получение ДНК. Участки ДНК, то есть гены, кодирующие синтез необходимого вещества, выделяют из хромосомы путем разрезания ферментами (рестриктазами). В некоторых случаях удается получить методом химического синтеза небольшие гены, аналогичные природным;
2) полученный ген (отрезок ДНК) с помощью ферментов (лигаз) соединяют ("сшивают") с другим отрезком ДНК, который будет служить вектором для встраивания гибридного гена в клетку. В качестве вектора можно использовать плазмиды, бактериофаги, вирусы;
3) вектор, несущий встроенный в него ген, встраивается в бактериальную или животную клетку, которая приобретает способность продуцировать не свойственное этой клетке вещество. В качестве таких реципиентов используют клетки Е. coli, P. aeruginosa, дрожжи, вирус осповакцины. Подбирая подходящего реципиента, учитывают выраженность синтеза необходимого вещества. Некоторые штаммы бактерий, получивших чужой ген, способны переключать половину своего потенциала на синтез соединения, кодируемого этим геном. Учитывается также возможность секреции вещества в окружающую среду, возможность культивирования в промышленных масштабах, экологическая безопасность.
Биологические препараты, полученные методом генетической инженерии: интерфероны, интерлейкины, инсулин, гормон роста, вакцина против гепатита В, антигены ВИЧ для диагностики и другие препараты.
Методы генетической инженерии перспективны:
- для получения антигенов с целью диагностики заболеваний, возбудители которых или не культивируются на питательных средах (сифилис, малярия) или опасны для культивирования;
- для получения препаратов, сырье для которых дорогостоящее или дефицитное: интерфероны, инсулин, гормон роста, интерлейкины и другие цитокины, регулирующие иммунитет, а также антитела.
|