Норма: 80-160 мг крахмала, гидролизованного 1мл биологической жидкости за час инкубации при 37 градусах цельсия.

↑

▷ Содержание

Стр 1 из 4Следующая ⇒

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 6

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ О-ТОЛУИДИНОВЫМ МЕТОДОМ.

Принцип метода: Альдогексозы (глюкоза, галактоза, ксилоза) при нагревании с орто- толуидином в кислой среде дают синезеленое окрашивание, интенсивность которого определяется колометрически.

Ход работы: 0,2мл сыворотки крови (спинномозговой жидкости) вносят в пробирку с 2мл 6% ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают и фильтруют. К фильтрату приливают 2мл. О-толуидинового реактива и ставят на 8 минут в кипящую баню. После охлаждения (15 мин) фотометрируют при красном светофильтре. В качестве контроля используется вода. Параллельно определяют светопоглощение стандартного раствора глюкозы (0,05мл глюкозы) обработанного так же, как и опытная проба.

А

Расчет: ------ х 200 = мг %

Б х 4

А-светопоглошение образца

Б-светопоглощение раствора глюкозы (800 мг на 100мл)

Норма: кровь –70-110мг %, плазма-60-100мг %, спинномозговая жидкость-45-70мг %.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 7

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА).

Принцип метода:

В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2

-------------------------

ФАД

ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2

Образующаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.

Ход работы: 0,2 мл сыворотки крови вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный водой фильтр. К фильтрату прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 2 капли раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 10мин. фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистилированой воды.

Количество глюкозы в сыворотке определяется по калибровочному графику.

Норма: 3,5-5,7 ммоль/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 8

КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРА В МОЧЕ - РЕАКТИВ НИЛАНДЕРА.

Реакция Ниландера относится к окислительно-восстановительным методам определения сахара. Она основана на окислении глюкозы солью висмута Вi (NO3)2 в щелочной среде. При кипячении, в случае наличия сахара в моче, выпадает черный осадок

металлического висмута.

O

|| 2+ ОН

R-C-H + Bi ----------------® R- COOH + Bi

t

Ход работы:

К 1-2 патологической мочи прибавляют 0,5-1мл реактива Ниландера и кипятят 2 мин.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 9

ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕТА- ЛИПОПРОТЕИДОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПО БУРШТЕЙНУ И САМАИ.

Значение метода: По изменению липопротеидов сыворотки можно судить о различных патологических процессах организма человека. Увеличение содержания бета-липопротеидов- наиболее часто встречающееся в липограмме отклонение от нормы. Оно отмечается при атеросклерозе, внутрипеченочном холестазе, механической желтухе, диабете, при резких гипопротеинемиях, гликогенозах, ксантоматозе и др. Увеличение бета-липопротеидов в крови тесно связано с гиперхолестеринемией, поскольку холестерин входит в состав, главным образом, бета-липопротеидов.

Принцип метода: Метод основан на избирательном осаждении бета-липопротеидов с помощью гепарина в присутствиии ионов Са. Введение гепарина в присутствии Са вызывает связывание бета-липопротеидов и помутнение раствора, оптическую плотность которого можно измерить на ФЭКе. Степень помутнения соответствует концентрации бета-липопротеидов.

Ход работы: К 2мл 0,025М р-ра СаСI2 добавляют 0,2 мл сыворотки крови и оптическую плотность р-ра определяют на ФЭКе (Е1) в кювете толщиной 0,5 см с красным светофильтром против воды. Затем в кювету добавляют 0,04мл 10% р-ра гепарина и содержимое перемешивают. Бета-липопротеиды образуют комплекс с гепарином, дающий помутнение р-ра. При этом оптическая плотность увеличивается (Е2). Определяют точно через 4мин после добавления гепарина. Разница Е1 – Е2 приходится на оптическую плотность, обусловленную липопротеидами. Количественную оценку проводят по калибровочному графику и выражают в мг%.

Норма 300-400мг% (3-6 г/л).

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 10

1. РЕАКЦИЯ ОБРАЗОВАНИЯ ИОДОФОРМА (НА АЦЕТОНОВЫЕ ТЕЛА).

1мл. мочи + 1мл. NаОН + 5 капель I2 в КI = желтое окрашивание.

2. ПРОБА С ХЛОРНЫМ ЖЕЛЕЗОМ.

1мл. мочи + 5 капель хлорного железа = вишнево- красное окрашивание.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 11

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

(МЕТОД ИЛЬКЕ).

Значение метода: Холестерин может накапливаться в крови в больших количествах при нарушении жирового обмена. Длительная гиперхолестеринемия при измененных условиях растворимости холестерина приводит к развитию атеросклероза. Гиперхолестеринемия наблюдается при механической желтухе, нефрите и нефрозах, гипотериозе, авитаминозе группы «В». Очень высокое содержание холестерина в крови наблюдается при сахарном диабете, липоидном нефрозе. Гипохолестеринемия обнаружена при анемиях, лихорадочных состояниях, сыпном тифе, голодании, гипертиреозе, раковой кахексии, поражении ЦНС.

Принцип метода: Холестерин в присутствии смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и конц. серной кислоты в соотношении 1:5:1 (реактив Ильке) превращается в сульфокислоту холестерина зеленого цвета.

Ход работы: в сухую пробирку к 2 мл реактива Ильке добавить 0,1 мл сыворотки. Сыворотку вносить медленно по стенке пробирки. Затем встряхивают содержимое пробирки и помещают в темное место на 20 мин. Окрашенную в зеленный цвет жидкость колориметрируют на ФЭКе, применяя красный светофильтр в кювете 0,5см. Контроль при фотометрировании - реактив Ильке. Содержание холестерина определяется по калибровочному графику.

В норме содержание холестерина 3,5-6,8 мМоль или 116-242 мг %

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 12

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ КИСЛОТНОСТИ, ОБЩЕЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ, СВОБОДНОЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ В ОДНОЙ ПОРЦИИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА.

Значение метода: При клиническом анализе желудочного содержимого важнейшее значение имеет содержание кислот. Повышенная кислотность может указывать на язвенную болезнь и (или) 12-перстной кишки, гиперацидный гастрит. Пониженная кислотность встречается при ряде желудочно-кишечных заболеваний (гипоацидный гастрит), раке желудка. Кислоты желудочного сока, всасываясь в кровь, играют большую роль в кислотно-щелочном равновесии организма.

Принцип метода: Определение общей кислотности, свободной и связаной соляной кислоты проводят титрованием желудочного содержимого щелочью, с применением индикатора, которые в зависимости от рН среды меняют окраску, индикатор фенолфталеин (индикатор на общую кислотность) в кислой среде остается бесцветным, а в щелочной окрашивается в розовый цвет. Индикатор диметиламиноазобензол в присутствии свободной НСI окрашивается в ярко-красный цвет, в ее отсутствии дает желтое или оранжевое окрашивание. Зона перехода фенолфталеина лежит в пределах рН 8,2-10, а диметиламиноазобензола рН 2,9-4,0.

Ход работы: Отмеривают пипеткой в колбочку 10 мл. Профильтрованного желудочного сока и добавляют 1-2 капли диметиламиноазобензола и 2 капли фенолфталеина. Титруют 0,1Н раствором NаОН до цвета красной рыбы, т.е желтовато-красной окраски. Первая точка. Затем продолжают тирование до лимонножелтого цвета. Вторая точка. И, наконец, до розового окрашивания. Т ретья точка.

Расчет:

Свободная НСI = Количество NаОН в 1 точке умноженное на 10.

Общая НСI= Количество NаОН во 2 точке + Количество NаОН в 3 точке: 2 * 10

Связанная НСI= Общая НСI- Свободная НСI

Общая кислотность= Количество NаОН в 3 точке умноженное на 10.

Норма

Общая кислотность желудочного сока 40-60Ед

Свободная НСI-20-40 Ед

Кислотность желудочного содержимого выражается в титрационных единицах – количестве 0,1 р-ра NаОН, пошедших на титрование 100мл желудочного сока.

(для опыта взято 10мл желудочного сока, поэтому умножают на 10).

Познавательные статьи:



Как правильно слушать собеседника

Типичные ошибки при выполнении бросков в баскетболе

Принятие христианства на Руси и его значение

Средства массовой информации США