Работа № 1. Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей

↑

▷ Содержание

Стр 1 из 2Следующая ⇒

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ ТГМА

Занятие № 12

САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Цель занятия:

Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно-микробиологической оценки объектов окружающей среды.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

2. Экологические ниши микробов:

· микрофлора почвы;

· микрофлора воды;

· микрофлора воздуха;

· микробиоценоз пищевых продуктов;

· микрофлора бытовых и производственных объектов и ее роль в распространении инфекционных болезней.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• проводить оценку санитарно–бактериологического состояния воздуха, воды

и смывов с рук, предметов;

• определять бактерии группы кишечной палочки (БГКП).

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

об оценке санитарно-бактериологического состояния почвы

Методические указания

Работа № 1. Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей

Среды: воздуха, воды, почвы

а) Микрофлора воздуха

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числу (ОМЧ) на МПА и количеству гемолитических стрептококков на кровяном агаре.

Сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по справочной таблице (см. теоретическую справку).

Опыт № 1. Посев воздуха методом седиментации по Коху на МПА.

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат:

Опыт № 2. Посев воздуха методом седиментации по Коху на кровяной агар

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат:

Заполнить таблицу.

Вывод:

б) Микрофлора воды

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния питьевой воды по результатам посевов. Определить ОМЧ, коли-титр, коли-индекс.

Оценить чистоту воды по справочной таблице (см. теоретическую справку). Сделать вывод.

Опыт № 3. Посев воды глубинным методом на МПА.

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат:

Опыт № 4. Посев воды методом мембранных фильтров на среду Эндо.

Подсчитать количество выросших колоний на мембранном фильтре.

Результат:

Заполнить таблицу:

Вывод:

в) Микрофлора почвы

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния почвы по результатам посевов (см. теоретическую справку). Определить ОМЧ, коли-титр, коли- индекс, перфрингенс-титр.

Результаты внести в таблицу. Сделать выводы.

Опыт № 5. Посев почвы на МПА глубинным методом.

Опыт № 6. Посев почвы на среду Кесслера (для выявления БГКП).

Опыт № 7. Посев почвы на среду Эндо (для выявления БГКП).

Опыт № 8. Посев почвы на среду Вильсон-Блера (для выявления анаэробов).

Опыт № 9. Мазок, сделанный со среды Вильсон-Блера

Опыт	метод	Схема опыта	Результат	Оценка (норма, выше нормы, ниже нормы)
№ 5   № 6,7     № 8,9	Глубинный посев	посев -1 -3 -6 разведения почвы МПА в воде   посев   -1 -3 –6 Эндо (Гр- пал.) среда Кесслера       -1 -3 -6 среда (Гр+ споровые палочки) Вильсон-Блера	ОМЧ=     коли-титр=   титр-перфрингенс=

Вывод:

Кожи рук

Цель: сделать посев микрофлоры кожи рук методом отпечатков на МПА

и среду Эндо. Записать в тетрадь номер своего посева Посевы изучить на следующем занятии.

Дано: чашки со средами МПА, Эндо.

Теоретическая справка

Микрофлора воздуха

Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по микробному числу - количеству особей, обнаруживаемых в 1 м³ воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий - представителей микрофло­ры дыхательных путей - гемолитический стрептококк, золотистый стафилококк.

Санитарно-микробиологическая оценка пищевых продуктов включает опре­деление микробного числа и санитарно-показательных микроорганизмов (БГКП), а также патогенных возбудителей.

Нормативы: чистый воздух зимой: ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков - до 35;

грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков – до 124.

Нормативные показатели микробной обсемененности воздуха в помеще­ниях больницы

Седиментационный метод (по Коху) - оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определенное время (5-10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, надписывают и выдерживают в термостате 24 часа и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязненности воздуха: по приблизительному подсчету на площадь 100 см² в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод (метод Кротова) - более точный количественный метод оп­ределения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью прибора.

Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексиглазовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благода­ря постоянному вращению чашки под входной щелью.

После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:

х= ^{а х 1000}

^V

х – количество микробов в м³ воздуха;

а - количество выросших на чашке колоний;

V - объем пропущенного через прибор воздуха, дм³ ;

1000 - объем воздуха, дм³.

Оценка санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числу на МПА методом Коха проводится по формуле Омелянского:

х= ^{а х 100 х 5 х 1000}

^{В х 10 х Т}

х – количество микробов в м³ воздуха;

а – количество колоний в чашке;

Т – время экспозиции, мин;

В – площадь чашки Петри в см² (78.5 см²);

100 – площадь (см²), на которую происходило оседание микробов;

1000 – объем воздуха в литрах;

5 – время по расчету Омелянского, мин;

10 – объем воздуха (л), из которого происходило оседание микробов.

Микрофлора воды

Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивается по: 1) микроб­ному числу - количеству мезофильных хемоорганотрофных бактерий в 1 мл воды; 2) коли-титру - наименьшему объему воды (мл), в котором обнаруживается БГКП и 3) коли-индексу - количеству БГКП в 1 л воды. Кроме того, в воде определяют наличие энтерококков, сальмонелл, энтеровирусов. Согласно ГОСТу на питьевую водопроводную воду, ее коли-титр должен быть не менее 300 мл, коли-индекс - не более 3, общее микробное число - не более 100.

Нормативы: ОМЧ не более 100, коли-титр - 333 мл, коли-индекс не более 3.

Метод мембранных фильтров

Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объеме 500 мл. Затем фильтры Зейтца помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37°С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП.

Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadасеае и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде.

Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не

перево­рачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс.

Микрофлора почвы

Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бактерий - показателей фекального загрязнения. Почвы, с преобладанием санитарно-показательных бакте­рий, расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязненными фекалиями человека или животных. Присутствие в почве Е. coli и Streptococcus faecalis указы­вает на свежее, бактерий родов Citrobacter и Enterobacter - на несвежее, a Clostridium perfringens - на давнее фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса - количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1г почвы, перфрингенс-титра - масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridium perfringens, общей численно­сти сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1г почвы.

Нормативы: чистая почва: коли-титр - 1 и выше; перфрингенс-титр - 0,01 и выше; ОМЧ- 100-1000.

Загрязненная почва: коли-титр - 0,9 - 0,01; перфрингенс-титр - 0,009-0,0001; ОМЧ-1000-100000.

Сильно загрязненная почва: коли-титр - 0,009 и ниже; перфрингенс-титр -0,00009 и ниже; ОМЧ - 10000-4000000.

Ход исследования. ОМЧ. Почву берут на глубине 10-15 см стерильным но­жом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10^-3, 10^-4, 10^-5. Из 2-х последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 45°С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Подсчитывают количество выросших колоний.

Определение коли-титра, перфрингенс-титра.

Различные разведения почвен­ной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера ( 1л дистиллиро­ванной воды, 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 10 г лактозы; рН 7,4-7,6; 4 мл 1% водного раствора генцианового фиолетового). Разливают в пробирки с поплавка­ми. Инкубируют при 43°С 48 часов. При получении в средах газообразования и помутнения производят высев петлей на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При выявлении в мазках Гр- палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба отрицательная (изменение окраски на синий цвет) проверяют ферментативные свойства выделенной культуры посевом на полужидкую среду с глюкозой. Появле­ние в среде кислоты и газа подтверждает наличие Е. coli. Определяют коли-титр по наименьшему объему, в котором обнаруживают БГКП.

Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной сус­пензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон-Блера. Инкубация при 43°С 48 часов. Учитывают результаты по образованию черных колоний Cl. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (Гр+ крупные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения), вычисляют перфрингенс-титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почерне­нию и разрыву среды впервые 12 часов роста при 43⁰ С).

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ ТГМА

Занятие № 12

САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Цель занятия:

Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно-микробиологической оценки объектов окружающей среды.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

2. Экологические ниши микробов:

· микрофлора почвы;

· микрофлора воды;

· микрофлора воздуха;

· микробиоценоз пищевых продуктов;

· микрофлора бытовых и производственных объектов и ее роль в распространении инфекционных болезней.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• проводить оценку санитарно–бактериологического состояния воздуха, воды

и смывов с рук, предметов;

• определять бактерии группы кишечной палочки (БГКП).

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

об оценке санитарно-бактериологического состояния почвы

Методические указания

Работа № 1. Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей

Среды: воздуха, воды, почвы

а) Микрофлора воздуха

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числу (ОМЧ) на МПА и количеству гемолитических стрептококков на кровяном агаре.

Сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по справочной таблице (см. теоретическую справку).

Опыт № 1. Посев воздуха методом седиментации по Коху на МПА.

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат:

Опыт № 2. Посев воздуха методом седиментации по Коху на кровяной агар

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат:

Заполнить таблицу.

Вывод:

б) Микрофлора воды

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния питьевой воды по результатам посевов. Определить ОМЧ, коли-титр, коли-индекс.

Оценить чистоту воды по справочной таблице (см. теоретическую справку). Сделать вывод.

Опыт № 3. Посев воды глубинным методом на МПА.

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат:

Опыт № 4. Посев воды методом мембранных фильтров на среду Эндо.

Подсчитать количество выросших колоний на мембранном фильтре.

Результат:

Заполнить таблицу:

Вывод:

в) Микрофлора почвы

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния почвы по результатам посевов (см. теоретическую справку). Определить ОМЧ, коли-титр, коли- индекс, перфрингенс-титр.

Результаты внести в таблицу. Сделать выводы.

Опыт № 5. Посев почвы на МПА глубинным методом.

Опыт № 6. Посев почвы на среду Кесслера (для выявления БГКП).

Опыт № 7. Посев почвы на среду Эндо (для выявления БГКП).

Опыт № 8. Посев почвы на среду Вильсон-Блера (для выявления анаэробов).

Опыт № 9. Мазок, сделанный со среды Вильсон-Блера

Опыт	метод	Схема опыта	Результат	Оценка (норма, выше нормы, ниже нормы)
№ 5   № 6,7     № 8,9	Глубинный посев	посев -1 -3 -6 разведения почвы МПА в воде   посев   -1 -3 –6 Эндо (Гр- пал.) среда Кесслера       -1 -3 -6 среда (Гр+ споровые палочки) Вильсон-Блера	ОМЧ=     коли-титр=   титр-перфрингенс=

Вывод:

Познавательные статьи:



Где возникла философия и почему?

Относительная высота сжатой зоны бетона

Сущность проекции Гаусса-Крюгера и использование ее в геодезии

Тарифы на перевозку пассажиров